[发明专利]特异位点羟基化巨大戟烷型二萜衍生物的制备方法

摘要

本发明属生物药物领域，涉及巨大戟烷型二萜的转化方法，本发明利用已知微生物对20‑去氧巨大戟醇及13‑O‑正十二烷酸巨大戟酯进行微生物转化，得到多种羟基化的巨大戟烷型二萜衍生物。所述巨大戟烷型二萜骨架中非活性碳位点增加羟基能为该类化合物提供新的化学修饰位点。

主权项

特异位点羟基化巨大戟烷型二萜衍生物的制备方法，其特征在于，通过下述转化制备方法，用微生物对20‑去氧巨大戟醇和13‑O‑正十二烷酸巨大戟酯进行微生物转化，获得下列通式的巨大戟烷型二萜化合物：其中，化合物1 16‑羟基‑20‑去氧巨大戟醇R1＝R2＝R4＝R5＝H,R3＝OH化合物2 19‑羟基‑20‑去氧巨大戟醇R1＝R2＝R3＝R5＝H,R4＝OH化合物3 12‑羟基‑20‑去氧巨大戟醇R2＝R3＝R4＝R5＝H,R1＝OH化合物4 12,19‑二羟基‑20‑去氧巨大戟醇R2＝R3＝R5＝H,R1＝R4＝OH化合物5 13‑O‑10’‑羟基正十二烷酸巨大戟酯R1＝R3＝R4＝R5＝H,R2＝‑OOC(CH2)8CHOHCH2CH3化合物6 13‑O‑11’‑羟基正十二烷酸巨大戟酯R1＝R3＝R4＝R5＝H,R2＝‑OOC(CH2)9CHOHCH3所述的微生物转化法中，使用的菌株包括：(1)拉曼被孢霉Mortierella ramanniana及其功能等同的变异体和突变体；(2)藤仓赤霉Gibberellafujikuroi及其功能等同的变异体和突变体；所述的微生物转化法中，包括步骤：(1)将生长在琼脂培养基上的微生物菌丝划线接种于马铃薯固体培养基上，在20‑28℃的恒温培养箱中培养3‑7天，得到试管种；(2)将试管种中的菌丝接种到三角瓶中，每瓶含有液体马铃薯培养基，培养温度为25‑28℃，转速为130‑180rpm，培养时间为24小时，获得种子液；(3)将种子液按2％～5％体积比接入新鲜马铃薯培养基，28℃，130‑180rpm条件下培养24‑72小时后，加入转化底物,在20‑28℃、130‑180rpm的条件下转化培养72‑240小时；(4)将发酵液用布氏漏斗减压过滤，获得发酵滤液，按照1:1.5体积比用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压蒸干，发酵产物用硅胶柱层析法分离得到所述巨大戟醇的羟基化产物。