[发明专利]特异位点羟基化巨大戟烷型二萜衍生物的制备方法

权利要求书

1.特异位点羟基化巨大戟烷型二萜衍生物的制备方法，其特征在于：用拉曼被孢霉Mortierella ramanniana菌种微生物(保藏号为CGMCC 3.03413)对20-去氧巨大戟醇进行微生物转化，获得下列通式中的巨大戟烷型二萜化合物1、化合物2、化合物3和化合物4；用藤仓赤霉Gibberella fujikuroi菌种微生物(保藏号为CICC 40272)对13-O-正十二烷酸巨大戟酯进行微生物转化，获得下列通式中的巨大戟烷型二萜化合物5和化合物6：

其中，

化合物1：16-羟基-20-去氧巨大戟醇，R₁＝R₂＝R₄＝R₅＝H,R₃＝OH

化合物2：19-羟基-20-去氧巨大戟醇，R₁＝R₂＝R₃＝R₅＝H,R₄＝OH

化合物3：12-羟基-20-去氧巨大戟醇，R₂＝R₃＝R₄＝R₅＝H,R₁＝OH

化合物4：12,19-二羟基-20-去氧巨大戟醇，R₂＝R₃＝R₅＝H,R₁＝R₄＝OH

化合物5：13-O-10’-羟基正十二烷酸巨大戟酯，

R₁＝R₃＝R₄＝R₅＝H,R₂＝-OOC(CH₂)₈CHOHCH₂CH₃

化合物6：13-O-11’-羟基正十二烷酸巨大戟酯，

R₁＝R₃＝R₄＝R₅＝H,R₂＝-OOC(CH₂)₉CHOHCH₃

所述的微生物转化法中，包括步骤：

(1)将生长在琼脂培养基上的微生物菌丝划线接种于马铃薯固体培养基上，在20-28℃的恒温培养箱中培养3-7天，得到试管种；

(2)将试管种中的菌丝接种到三角瓶中，每瓶含有液体马铃薯培养基，培养温度为25-28℃，转速为130-180rpm，培养时间为24小时，获得种子液；

(3)将种子液按2％～5％体积比接入新鲜马铃薯培养基，28℃，130-180rpm条件下培养24-72小时后，加入转化底物,在20-28℃、130-180rpm的条件下转化培养72-240小时；

(4)将发酵液用布氏漏斗减压过滤，获得发酵滤液，按照1:1.5体积比用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压蒸干，发酵产物用硅胶柱层析法分离得到所述巨大戟醇的羟基化产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将活化后的微生物活体种子液按一定体积比接入马铃薯培养基，28℃培养24-72小时，再加入转化底物的乙醇溶液。