[发明专利]特异位点羟基化巨大戟烷型二萜衍生物的制备方法

说明书

本发明属生物药物领域，涉及巨大戟烷型二萜的转化方法，本发明利用已知微生物对20‑去氧巨大戟醇及13‑O‑正十二烷酸巨大戟酯进行微生物转化，得到多种羟基化的巨大戟烷型二萜衍生物。所述巨大戟烷型二萜骨架中非活性碳位点增加羟基能为该类化合物提供新的化学修饰位点。

技术领域

本发明属生物药物领域，涉及巨大戟烷型二萜化合物的转化方法，具体涉及利用已知微生物对巨大戟烷型二萜衍生物进行微生物转化，制备极性增强的巨大戟烷型二萜衍生物。

背景技术

现有技术公开了巨大戟烷型化合物是一类由5/7/7/3四环稠合而成的大环二萜天然产物。这类二萜来源于各种大戟属植物中[Journal of Natural Products,2002,65(9):1246-1251]，多数在其结构母核C-3的羟基或C-13位的羟基连接有长链脂肪酸成酯，如13-O-正十二烷酸巨大戟酯(13-oxyingenol dodecanoat)，而巨大戟二萜醇(ingenol)和20-去氧巨大戟二萜醇(20-deoxyingenol)为极性较大的游离型巨大戟二萜醇。巨大戟烷型骨架的化合物大多具有良好的生物活性，例如有抑制肿瘤细胞生长的活性[Phytochemistry,2008,69(3):812-2819]、抑制细胞分裂活性[Journal of Science of Food andAgriculture,2015,44(8):3188-3194]、γ-干扰素调节作用[International Journal ofMolecular Sciences,2012,13(9):11247-11259]等。

现有的巨大戟烷型二萜多数由植物中提取分离得到，或以植物中提取得到的巨大戟烷型二萜为原料再合成新型的巨大戟二萜衍生物。已有专利公开了以大戟植物中萃取得到的20-去氧巨大戟二萜醇衍生物为原料进行化学反应获得巨大戟二萜醇-3-当归酸酯(CN104470888A)；另有专利公开了以植物中得到的巨大戟二萜醇为原料，进一步衍生合成多种巨大戟二萜醇-3-酰化物，并从中筛选出可刺激中性粒细胞氧化爆发、可刺激角质形成的细胞IL-8释放、或可在B16小鼠黑色素瘤模型中表现出活性的先导化合物(CN103402977A)。

以上巨大戟二萜衍生物的获取都是以骨架中原生醇羟基的存在为基础，而本发明拟通过微生物转化的方法，在巨大戟烷二萜骨架的非活性碳位点引入羟基，为后续的化学修饰提供活性基团。

微生物转化是利用微生物生长过程中合成的特异酶完成的特定生化反应。据报道，微生物在生长过程中可以合成多种酶，催化不同反应，例如氧化反应、还原反应、水解反应、脱氢反应、缩合反应和开环反应等，这类酶催化反应具有特异性和专属性，相对于化学反应，在底物的非活性碳原子上进行反应更高效环保。

因此，本申请利用微生物对巨大戟烷型二萜类化合物进行转化研究，以期获得一些难以用传统化学合成制备的特异位点(尤其是其C-12和C-16等低活性碳位点)的转化产物，为后续结构修饰提供活性位点。

发明内容

本发明的目的是提供巨大戟烷型二萜非活性碳上进行羟基化的方法，尤其是制备具有生理活性、难以通过传统化学法得到、非活性碳上羟基化的巨大戟烷型二萜的合成方法。

本发明中分别使用拉曼被孢霉Mortierella ramanniana CGMCC 3.03413和藤仓赤霉Gibberella fujikuroi CICC 40272对20-去氧巨大戟醇(20-deoxyingenol)和13-O-正十二烷酸巨大戟醇酯(13-oxyingenol dodecanoat)进行微生物转化，获得以下结构通式的巨大戟烷型二萜衍生物：

经鉴定，所获得的巨大戟烷型二萜衍生物为：