[发明专利]一种利用流体动力色谱同时分离检测多组microRNA的方法

摘要

一种利用流体动力色谱同时分离检测多组microRNA的方法，属于生物化学领域。包括以下步骤1)确定多组microRNA，设计互补配对的ssDNA序列，第一条ssDNA完全与第一条microRNA互补配对，第二条ssDNA在互补链碱基个数的基础上增加若干个碱基，作为分离标签，以此类推；2)将多组microRNA混合物与相对应设计好的互补ssDNA杂交，杂交后加入核酸荧光染料，发出强荧光信号；3)多组杂交后的双链混合物，通过低气压进样，并在高气压驱动下，在微纳毛细管内完成色谱分离，最后在毛细管尾端窗口完成定量检测。本发明方法可实现多组microRNA色谱分离，并进行实时高灵敏快速检测。

主权项

一种利用流体动力色谱分离检测多组microRNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)确定几组待分离检测的microRNA，设计与其互补的ssDNA；其中假设几组待分离检测的microRNA依次为microRNA‑1、microRNA‑2、以此类推直到microRNA‑n，则与microRNA‑1、microRNA‑2……microRNA‑n互补的ssDNA以此为ssDNA‑1、ssDNA‑2……ssDNA‑n；ssDNA‑1完全与microRNA‑1互补，不添加其他碱基；ssDNA‑2除了完全与microRNA‑2互补的序列之外，另添加一定长度的碱基序列；ssDNA‑3完全与microRNA‑3互补的序列之外，还添加了相对ssDNA‑2具有一定长度的的碱基序列，以此类推，ssDNA‑n相对ssDNA‑n‑1增加有一定长度的碱基序列，在ssDNA‑1、ssDNA‑2……ssDNA‑n中增加的碱基序列可以相同也可以不同，但ssDNA‑1、ssDNA‑2……ssDNA‑n均不互相杂交缠绕；以此类推，ssDNA‑n总是比ssDNA‑n‑1多出一定数量的碱基，构成分离标签；2)设计好的ssDNA分别与microRNA杂交，杂交条件：95℃变性5min，温度降至42℃退火25min；杂交后得到杂交双链；杂交后加入核酸荧光染料，反应10min；3)杂交后加入核酸荧光染料的体系在高纯氮气低压下进样，在未经任何修饰的裸微纳毛细管内分离；分离后，在毛细管尾端进行激光诱导荧光检测器定量；ssDNA‑n比ssDNA‑n‑1多出至少10个碱基。