[发明专利]一种免疫磁性纳米微粒的制备方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种免疫磁性纳米微粒的制备方法。本发明利用硅酸酯对四氧化三铁磁纳米微粒进行表面包覆，降低其表面活化能，从而大大提高磁纳米微粒的稳定性，同时可调节硅酸酯的浓度包覆厚度，然后在其表面进行羧基修饰，整个过程反应条件温和，无需惰性气体环境、不用高温高压等苛刻条件，无需复杂装置与大型设备，原物料易得、无需大量有机溶剂，同时合成的磁微粒粒径可调控，将羧基修饰的磁微粒通过活化剂活化后与生物活性分子的游离氨基通过酰胺键共价结合，相较于醛胺缩合反应的亚胺结构以及胶体金的非共价结合更加牢固。

主权项

一种免疫磁性纳米微粒的制备方法，其特征在于，所述方法步骤如下：a.制备四氧化三铁纳米微粒内核配制二价铁盐溶液，加至含有柠檬酸钠和硝酸盐的碱性溶液中，在25～90℃条件下搅拌5分钟以上，得到的沉淀离心分离后，用碱液洗涤三次，得到稳定的磁悬浮液；b.制备表面硅包覆的纳米磁微粒用步骤a制备的纳米磁微粒，磁性分离，调节pH值为10～13，将正硅酸乙酯溶解于乙醇中，并按一定比例加入至分散液中，30～50℃条件下混合物搅拌4～5小时，在磁微粒表面生成的一层二氧化硅得到的包覆；磁分离得到表面硅包覆的磁微粒；c.制备表面羧基修饰的磁微粒按酸酐基团与氨基摩尔比(1.2～2):1将称取氨基化硅烷与酸酐在无水溶剂中搅拌10到60分钟，得到羧基化硅烷，将羧基化硅烷溶解于无水乙醇中，加入步骤b制备的纳米磁微粒，用碱液调节pH值至10～13，30～50℃搅拌4～5小时，然后用无水乙醇与纯化水洗涤，磁分离，得到表面羧基修饰的纳米磁微粒；d.制备免疫磁微粒将步骤c制备的羧基磁微粒用pH值为6.0～7.0的MES缓冲液洗涤三次，再分散于此缓冲液中，用EDC与Sulfo‑NHS在室温下活化振荡反应0.5～1小时后，磁分离，洗涤除去未反应的试剂，加入抗原、抗体或其它生物活性分子，室温振荡反应3h，磁分离，缓冲液洗涤后即得；所述氨基包括伯胺基和仲胺基。