[发明专利]一种免疫磁性纳米微粒的制备方法

权利要求书

1.一种免疫磁性纳米微粒的制备方法，其特征在于，所述方法步骤如下：

a.制备四氧化三铁纳米微粒内核

配制二价铁盐溶液，加至含有柠檬酸钠和硝酸盐的碱性溶液中，在25～90℃条件下搅拌5分钟以上，得到的沉淀离心分离后，用碱液洗涤三次，得到稳定的磁悬浮液；

b.制备表面硅包覆的纳米磁微粒

用步骤a制备的纳米磁微粒，磁性分离，调节pH值为10～13，将正硅酸乙酯溶解于乙醇中，并按一定比例加入至分散液中，30～50℃条件下混合物搅拌4～5小时，在磁微粒表面生成的一层二氧化硅得到的包覆；磁分离得到表面硅包覆的磁微粒；

c.制备表面羧基修饰的磁微粒

按酸酐基团与氨基摩尔比(1.2～2):1将称取氨基化硅烷与酸酐在无水溶剂中搅拌10到60分钟，得到羧基化硅烷，将羧基化硅烷溶解于无水乙醇中，加入步骤b制备的纳米磁微粒，用碱液调节pH值至10～13，30～50℃搅拌4～5小时，然后用无水乙醇与纯化水洗涤，磁分离，得到表面羧基修饰的纳米磁微粒；

d.制备免疫磁微粒

将步骤c制备的羧基磁微粒用pH值为6.0～7.0的MES缓冲液洗涤三次，再分散于此缓冲液中，用EDC与Sulfo-NHS在室温下活化振荡反应0.5～1小时后，磁分离，洗涤除去未反应的试剂，加入抗原、抗体或其它生物活性分子，室温振荡反应3h，磁分离，缓冲液洗涤后即得；

所述氨基包括伯胺基和仲胺基。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述二价铁盐为硫酸亚铁、氯化亚铁中的一种；硝酸盐为硝酸钠、硝酸钾中的一种；碱液为氨水、四甲基氢氧化铵、氢氧化钠中的一种。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述二价铁盐摩尔浓度比为0.01mol/L～1mol/L；柠檬酸钠浓度为0.5mmol/L～10mmol/L，硝酸盐浓度为0.2mol/L～3mol/L。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述正硅酸乙酯与四氧化三铁的质量比为(1～5)：(1～20)。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述酸酐为丁二酸酐、戊二酸酐、己二酸酐、马来酸酐、邻苯二甲酸酐中的一种；氨基化硅烷为γ-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-氨丙基三甲氧基硅烷、二乙烯三氨基丙基三甲氧基硅烷、N-(β-氨乙基)-γ-氨丙基三乙氧基硅烷、N-(β-氨乙基)-γ-氨丙基甲基二甲氧基硅烷中的一种；无水溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜中的一种。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述酸酐与氨基化硅烷的摩尔比为(1～5)：(1～20)。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述磁纳米微粒与EDC，Sulfo-NHS的质量摩尔比为1g：(1～100mmol)：(1～50mmol)；加入的所述磁微粒与抗体的质量比1g：(0.1～10mg)。