[发明专利]高效液相色谱串联质谱技术检测唾液中孕酮和睾酮的方法

摘要

本发明提供了一种高效液相色谱串联质谱技术检测唾液中孕酮和睾酮的方法；采用高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的唾液中孕酮和睾酮，利用高效液相色谱将孕酮和睾酮与杂质分离，内标法定量，以孕酮的同位素作为内标，以标准品与内标的浓度比为X轴，标准品与内标的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算孕酮和睾酮的含量。本发明方法灵敏度高、特异性强、准确性好，前处理过程简单；分析时间短，6.5min内即可完成孕酮和睾酮的分析，精密度及加标回收率满足检测要求。

主权项

高效液相色谱串联质谱技术检测唾液中孕酮和睾酮的方法，其特征在于，包括如下步骤：采用高效液相色谱串联质谱技术检测经预处理的唾液中孕酮和睾酮，利用高效液相色谱将孕酮和睾酮与杂质分离，再利用同位素内标法定量，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算孕酮和睾酮的含量；(1)具体色谱条件为：流动相A：体积比为0.05％的甲酸水；流动相B：甲醇，纯度为色谱纯；色谱柱型号：Phenomenex Kinetex‑C18，50×2.1mm，2.6μm；采用梯度洗脱的方式，见表1；流速为0.2ml/min，柱温为40℃，进样体积为20μl；表1流动相梯度洗脱参数(2)质谱条件：在电喷雾电离正离子检测模式下，采用多反应监测的质谱扫描模式；喷雾电压为5000V；碰撞气为6；气帘气为10；离子源气流GS1为50，GS2为50；离子源温度为500℃；同时监测目标物孕酮m/z 315.3→109.1、睾酮m/z 289.3→109.1、同位素内标d9‑孕酮m/z 324.4→100.1；孕酮和睾酮及内标的去簇电压、碰撞电压、碰撞能和碰撞池出口电压参数见表2；表2孕酮和睾酮及内标的质谱参数所述经预处理的唾液按照如下方法制备得到：取唾液500μl于2ml离心管中，加入50ng/ml内标溶液10μl，混匀后，加1ml萃取液，涡旋混合5min，13000r/min离心10min，取上清800μl；氮气吹干，以100μl10％甲醇水复溶，涡旋3min；13000r/min，离心3min，进样检测；所述内标溶液配制：称取孕酮同位素内标，甲醇溶解；配制1mg/ml的储备液；以甲醇稀释至50ng/ml即得实验所需内标溶液；所述萃取液为乙酸乙酯；所述氮气吹干温度为40～50℃。