[发明专利]一种检测血清中循环microRNA的方法

摘要

本发明是基于p19蛋白修饰的磁性微球的特异性富集作用和滚环扩增放大技术，开发了一种简单的方法用于血清中循环microRNA的检测。首先，将双功能探针与目标miRNA杂交形成dsRNA结构，并通过与p19蛋白的特异性结合作用富集到PFMBs表面。然后将加热释放出的JP探针/miRNA复合物作为引物进行RCA反应，从而产生长单链DNA产物。加入检测探针与RCA产物杂交形成长dsDNA，并嵌入大量荧光染料SYBR Green获得增强的荧光信号。通过利用PFMBs特异性富集目标物及降低背景信号，并结合RCA进行信号放大，所建立的方法具有很高的灵敏度。在最优实验条件下，得到该方法的线性范围为10 fM~100 pM，miRNA的检测限低至1 fM。

主权项

一种检测血清中循环microRNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：通过杂交形成双功能探针/miRNA 的复合物，用p19蛋白修饰的磁性微球对目标 miRNA 进行富集以及利用滚环扩增技术进行信号放大；具体步骤如下：（1）双功能探针与目标miRNA杂交形成双链的dsRNA，dsRNA通过与p19蛋白修饰的磁性微球特异性结合被捕获，通过加热可将dsRNA从蛋白修饰的磁性微球上释放收集起来得到双功能探针/ miRNA复合物；（2）将步骤（2）释放出的双功能探针/ miRNA复合物中的双功能探针作为引物进行 RCA 反应，得到含有几千个重复序列的长线形单链 DNA，加入检测探针，与 RCA 产物进行杂交形成 dsDNA；（3）将荧光染料嵌入剂嵌入步骤（2）所述的 dsDNA 溶液中可获得强荧光，从而实现目标 miRNA 的灵敏检测。