[发明专利]一种发酵生产4-Acetylantroquinonol B的方法

摘要

本发明属于发酵技术领域，特别涉及一种发酵产4‑Acetylantroquinonol B的方法。牛樟芝是一种专性寄生于台湾腐朽牛樟树上的真菌，其子实体中含有多种天然活性物质，其中4‑Acetylantroquinonol B是近几年从其子实体中分离出的一种具有较好的抗癌作用的物质，但目前牛樟芝的研究主要集中在提高菌体量、多糖产量方面，对樟芝特有的活性代谢产物4‑Acetylantroquinonol B为目标的发酵研究较少，本发明从牛樟芝菌种出发，通过分阶段发酵培养、培养条件和培养基组成的优化，最终在不添加任何诱导物和前提物的情况下，从牛樟芝液体发酵所获得的菌体中获得4‑Acetylantroquinonol B，其产量达2.6‑5mg/g。该方法是一种发酵生产4‑Acetylantroquinonol B的新方法。

主权项

1.一种发酵生产4‑ Acetylantroquinonol B的方法，其特征在于，包括如下步骤:（1）菌种的扩大培养：以挖块接种将牛樟芝菌（Antrodia camphorata）接种至新的固体培养基中进行菌种的扩大培养，待固体培养基中形成新的牛樟芝菌落；所述牛樟芝菌为Antrodia camphorata BCRC 35396菌株；（2）牛樟芝孢子悬液的制备：在新的固体培养牛樟芝菌落中加入无菌水，以玻璃棒刮下孢子，形成孢子悬液；（3）牛樟芝菌液体种子培养：将制备好的孢子悬液加入液体种子培养基中培养，通过优化培养条件和培养基组成，使液体种子形成规则的小球状；（4）第一阶段液体发酵：将步骤（3）的液体种子接种至液体发酵培养基中，100‑180rpm，20‑26℃，培养8‑12d；液体发酵培养基组成为: 葡萄糖15‑25 g/L，蛋白胨5‑10 g/L，K2HPO4 0.5‑1.5 g/L，MgS04·7H2O 0. 1‑0.8 g/L，麦芽浸粉 15‑25 g/L，苯酚0.05‑0.2 g/L；（5）第二阶段液体发酵：第一阶段发酵培养后，补加葡萄糖， 调整发酵条件为180‑220rpm，27‑35℃，培养5‑10d；补加葡萄糖的质量按照每1L初始液体发酵培养基补加葡萄糖10‑50g；（6）菌体干重的测定：发酵结束后取出菌体，抽滤，除去菌体中的液体培养基，再以去离子水冲洗2‑3次，抽滤，烘干至恒重，测定其质量即为菌体干重；（7）菌体胞内物质提取：取烘干后的菌体，采用常规方法进行破胞处理并提取目标活性物质4‑ Acetylantroquinonol B。