[发明专利]一种发酵生产4-Acetylantroquinonol B的方法

说明书

本发明属于发酵技术领域，特别涉及一种发酵产4‑Acetylantroquinonol B的方法。牛樟芝是一种专性寄生于台湾腐朽牛樟树上的真菌，其子实体中含有多种天然活性物质，其中4‑Acetylantroquinonol B是近几年从其子实体中分离出的一种具有较好的抗癌作用的物质，但目前牛樟芝的研究主要集中在提高菌体量、多糖产量方面，对樟芝特有的活性代谢产物4‑Acetylantroquinonol B为目标的发酵研究较少，本发明从牛樟芝菌种出发，通过分阶段发酵培养、培养条件和培养基组成的优化，最终在不添加任何诱导物和前提物的情况下，从牛樟芝液体发酵所获得的菌体中获得4‑Acetylantroquinonol B，其产量达2.6‑5mg/g。该方法是一种发酵生产4‑Acetylantroquinonol B的新方法。

技术领域

本发明属于生物发酵技术领域，特别涉及一种发酵生产4-乙酰基安卓奎诺尔B(4-Acetylantroquinonol B)的方法。

背景技术

牛樟芝子实体寄生于牛樟树树干腐朽的内壁或倒伏在地上靠近土表的无树皮表面，具有强烈的牛樟树香气，含有高含量精油，外形呈板形、钟形、马蹄形或是不规则形状，多年生、无柄，紧贴于木材表面生长。不少学者对牛樟芝子实体活性成分及其药理活性进行了研究，证实牛樟芝子实体含有高氧化度三萜、活性多糖、甾醇等多种活性成分等。

近年来，牛樟芝子实体中又分离鉴定出的了4-Acetylantroquinonol B等三萜类化合物，其在保肝、抗癌方面具有卓越的疗效。Yu-Wei Lin等已研究证实4-Acetylantroquinonol B在治疗肝癌上有较好的效果；Tung-Cheng Chang等也已研究证实4-Acetylantroquinonol B在治疗大肠癌上同样具有较好的效果，其不仅能够抑制癌细胞的增长，也能够有效的降至癌细胞的抗药性，是一种具有应用前景的癌症治疗药物。

但是，由于牛樟芝严格的寄主特性以及自然产量的稀少，而且其唯一寄主牛樟树资源也十分匮乏，致使牛樟芝子实体远不足供应市场需求且价格十分昂贵。而利用现代生物技术进行樟芝人工培养得到菌体产物是解决樟芝供需矛盾的有效解决方式，Yu-Wei Lin等已经从液体培养的牛樟芝菌体中鉴定出了4-Acetylantroquinonol B，但是其产量低；Chien-Chi Chiang等采用液体发酵的方式，通过加入诱导物有效的提高了液态发酵的菌体中4-Acetylantroquinonol B的含量，最终其产量达0.8mg/g；因此通过液体发酵法来获得4-Acetylantroquinonol B的研究仍处于初级阶段，而不添加任何诱导物或前提物的条件下液态发酵产4-Acetylantroquinonol B的研究尚未见报导。本发明从实验室自主分离出的牛樟芝菌种出发，在不添加任何诱导物和前提物的情况下，分两阶段发酵培养，从牛樟芝液体发酵的菌体中获得了较高产量的4-Acetylantroquinonol B。

发明内容

本发明目的是克服现有技术产量低的不足，提供一种利用牛樟芝菌丝体发酵获得高产量活性物质4-乙酰基安卓奎诺尔B(4-Acetylantroquinonol B)的新方法。

本发明为实现上述目的采取以下技术方案，一种发酵生产4-Acetylantroquinonol B的方法，包括如下步骤：

(1)菌种的扩大培养：以挖块接种将牛樟芝菌接种至新的固体培养基中进行菌种的扩大培养，待固体培养基中形成新的牛樟芝菌落；

(2)牛樟芝孢子悬液的制备：在新的固体培养牛樟芝菌落中加入无菌水，以玻璃棒刮下孢子，形成孢子悬液；

(3)牛樟芝菌液体种子培养：将制备好的孢子悬液加入液体种子培养基中培养，通过优化培养条件和培养基组成，使液体种子形成规则的小球状；

(4)第一阶段液体发酵：将步骤(3)的液体种子接种至液体发酵培养基中，100-180rpm，20-26℃，培养8-12d；