[发明专利]一种预防用H9N2型流感病毒样颗粒疫苗及其制备方法

摘要

本发明提供一种预防用H9N2型流感病毒样颗粒疫苗及其制备方法；所述疫苗组分包括H9N2型流感病毒样颗粒，所述病毒样颗粒为H9N2型流感病毒的病毒样空壳颗粒结构，空壳颗粒结构囊膜表面含有H9N2型流感病毒的一种或者多种的结构蛋白；制备方法先合成HA、NA和M1基因DNA，构建重组质粒pFastBac‑DuaL‑HA‑NA‑M1，将构建的重组质粒导入E.coLi感受态细胞株DH10Bac细胞并经过蓝白筛选得到质粒rBacmid‑HA‑NA‑M1，转染SF9昆虫细胞得到病毒样颗粒，将佐剂溶于病毒样颗粒经孵育、离心清洗后得所述疫苗。本发明疫苗可刺激机体产生较强烈的免疫应答，免疫原性强。

主权项

1.一种预防用H9N2型流感病毒样颗粒疫苗，其特征在于，其组分包括H9N2型流感病毒样颗粒；其中，所述H9N2型病毒样颗粒为H9N2型流感病毒的病毒样空壳颗粒结构，所述空壳颗粒结构的囊膜表面含有H9N2型流感病毒的结构蛋白；所述结构蛋白为H9N2型流感病毒的血凝素HA蛋白、神经氨酸酶NA蛋白和基质蛋白M1；其中，所述HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码所述HA蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述NA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，编码所述NA蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述M1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，编码所述M1蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述疫苗的组分还包括佐剂；所述佐剂为微球佐剂；所述微球佐剂采用如下方法制备：1）将乙酸、吐温‑80、水和壳聚糖混合均匀，配制成混合溶液，所述混合溶液中壳聚糖的质量浓度为0.25%~0.3%、乙酸的质量浓度为2%~2.5%、吐温‑80的质量浓度为1%~1.2%；2）在磁力搅拌和超声作用下，将质量浓度为10%~15%的Na₂SO₄溶液以1~1.2 mL/min的速度滴入步骤1）配制的混合溶液中，持续磁力搅拌和超声作用20~25min后，以2750~3500r/min离心20~30min，用超纯水清洗离心沉淀物，以2750~3500r/min离心20~30min，再次重复两次洗涤离心后，将沉淀物冷冻干燥，得到微球佐剂；其中，所述Na₂SO₄溶液与所述混合溶液的体积比为1:100~120。