[发明专利]一种预防用H9N2型流感病毒样颗粒疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供一种预防用H9N2型流感病毒样颗粒疫苗及其制备方法；所述疫苗组分包括H9N2型流感病毒样颗粒，所述病毒样颗粒为H9N2型流感病毒的病毒样空壳颗粒结构，空壳颗粒结构囊膜表面含有H9N2型流感病毒的一种或者多种的结构蛋白；制备方法先合成HA、NA和M1基因DNA，构建重组质粒pFastBac‑DuaL‑HA‑NA‑M1，将构建的重组质粒导入E.coLi感受态细胞株DH10Bac细胞并经过蓝白筛选得到质粒rBacmid‑HA‑NA‑M1，转染SF9昆虫细胞得到病毒样颗粒，将佐剂溶于病毒样颗粒经孵育、离心清洗后得所述疫苗。本发明疫苗可刺激机体产生较强烈的免疫应答，免疫原性强。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种预防用H9N2型流感病毒样颗粒疫苗及其制备方法。

背景技术

H9N2型流感病毒即甲型流感病毒的禽流感病毒一种亚型，它最早于20世纪末期被发现存在于火鸡之上。实验表明H9N2亚型流感病毒对鸡具有较强的致病性，引起鸡的免疫力下降，继发感染引起鸡的大批死亡，引起蛋鸡的产蛋下降，造成严重的经济损失，只具对人的致病性弱，另一方面这种病毒的传播很强，已经有了较为广泛的传播。H9N2型流感病毒不仅能让机体发生免疫抑制，还可以让各种继发性的感染发生在宿主身上。据报道某地发现猪已经被这种病毒所感染。研究表明，这种病毒完全可以传染到低等的哺乳动物，人也可以被这种病毒所感染。

由于H9N2型流感病毒的潜在危害能力较为巨大，于是世界上越来越多的人对它进行了关注，越来越多的机构对它进行了研究，研究证明了其确实可以感染人类。研究还发现病毒很有可能在人体里与其它的流感病毒亚型进行基因重组，然后形成新的病毒亚型，危害人类。

目前的传统疫苗主要用于鸡的感染，而现有的传统疫苗用分离的具有感染性的流感病毒通过鸡胚复制病毒制备，需要加灭活剂甲醛和油乳佐剂，对人类的食用存在不安全的因素，并且生产成本高，生产工艺复杂。同时由于它对人类存在的潜在危害，及在体内为其他病毒提供基因组基因而基因重组形成新亚型流感，危害人类安全，故为了人类的安全，动物禽流感的防控，防止H9N2型流感病毒的大规模、无节制的传播，研制H9N2型流感病毒的新型疫苗(VLP疫苗)很有必要且具有十分重要的经济意义和社会意义。

发明内容

基于现有技术存在的上述不足，本发明所要解决的技术问题是：如何提供一种预防用H9N2型流感病毒样颗粒疫苗及其制备方法，弥补现在尚没有H9N2型流感病毒样颗粒疫苗的空白，以防止H9N2型流感病毒在动物之间传播及向人类传播，防止H9N2型流感病毒对人类的潜在威胁，且具有安全性高、免疫原性强、稳定性好的特点。

实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种预防用H9N2型流感病毒样颗粒疫苗，其组分包括H9N2型流感病毒样颗粒；其中，所述H9N2型病毒样颗粒为H9N2型流感病毒的病毒样空壳颗粒结构，所述空壳颗粒结构的囊膜表面含有H9N2型流感病毒的一种或者多种的结构蛋白。

所述结构蛋白为H9N2型流感病毒的血凝素HA蛋白、神经氨酸酶NA蛋白和/或基质蛋白M1；其中，所述HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码所述HA蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述NA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，编码所述NA蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述M1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，编码所述M1蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

上述预防用H9N2型流感病毒样颗粒疫苗的制备方法，包括如下步骤：