[发明专利]一种基于纳米探针C60的癌胚抗原的电化学免疫传感器的构建方法

摘要

本发明涉及电化学免疫传感器技术领域，特别是涉及一种基于纳米探针C₆₀的癌胚抗原的电化学免疫传感器的构建方法。具体是先采用循环伏安法在玻碳电极表面修饰上金纳米簇作为抗体捕获基底，然后将第一抗体与抗原依次固载在电极表面，最后通过抗原与抗体之间的特异性结合来固定AuNPs@L-cys-C₆₀标记的第二抗体。金纳米簇具有良好的生物相容性，优异的导电性和大的表面积，能够促进蛋白质和电极之间的电子传递。以AuNPs@L-cys-C₆₀为氧化还原纳米探针，基于抗原抗体之间良好的特异性，该传感器用于检测癌胚抗原，根据对不同浓度的癌胚抗原的电化学信号的不同，实现对癌胚抗原的检测。

主权项

一种基于纳米探针C₆₀的癌胚抗原(CEA)的电化学免疫传感器的构建方法，其特征在于包括以下步骤： (1)用Al₂O₃抛光粉打磨直径为4 mm的玻碳电极(GCE)，分别在乙醇和超纯水中超声清洗3 min，氮气吹干；以10 mL含有浓度为1.0 mmoL/L的HAuCl₄溶液为底液，以GCE为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为对电极在‑0.8～0.6 V电位范围内进行循环伏安扫描30圈后，将电极在0.1 moL/L的KCl溶液中浸泡过夜，用PBS(pH 7.4)缓冲液冲洗得到金纳米簇修饰玻碳电极(nano‑Au/GCE)；(2)取10 μL 1~2.5 μg/mL的CEA第一抗体(Ab₁)标准溶液滴涂到nano‑Au/GCE表面，在4 ℃冰箱中孵育12 h，用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗除去物理吸附得到Ab₁/nano‑Au/GCE；(3)取10 μL 质量分数为1~3%的BSA溶液滴涂到Ab₁/nano‑Au/GCE表面，在37 ℃下孵育1 h，以封闭非特异性结合位点，用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗电极表面得到BSA/Ab₁/nano‑Au/GCE；(4)将10 μL 0.1 pg/mL~1.0ng/mL的一系列不同浓度的CEA标准溶液滴涂到BSA/Ab₁/nano‑Au/GCE表面用于与抗体特异性识别，在37 ℃下孵育60 min，用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗电极表面得到CEA/BSA/Ab₁/nano‑Au/GCE；(5)滴加6~10 μL AuNPs@L‑cys‑C₆₀标记CEA第二抗体(Ab₂‑AuNPs@L‑cys‑C₆₀)到上述电极表面，在37 ℃下孵育60 min，用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗电极表面，再取10 μL 10 mmoL的四辛基溴化铵甲苯溶液滴涂到电极表面室温下孵育10min后用PBS(pH 7.4)缓冲溶液冲洗电极表面，制得一种基于纳米探针C₆₀的CEA的电化学免疫传感器(Ab₂‑AuNPs@L‑cys‑C₆₀/CEA/BSA/Ab₁/nano‑Au/GCE)。