[发明专利]一种基于纳米探针C60的癌胚抗原的电化学免疫传感器的构建方法在审
| 申请号： | 201610032386.3 | 申请日： | 2016-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN105675697A | 公开（公告）日： | 2016-06-15 |
| 发明（设计）人： | 郑香丽;周长利;夏方诠;田栋;花小霞;乔雪莹 | 申请（专利权）人： | 济南大学 |
| 主分类号： | G01N27/48 | 分类号： | G01N27/48;G01N27/327;G01N33/574;G01N33/543 |
| 代理公司： | 济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240 | 代理人： | 李茜 |
| 地址： | 250022 山东省济*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 纳米 探针 sub 60 癌胚抗原 电化学 免疫 传感器 构建 方法 | ||
技术领域
本发明涉及电化学免疫传感技术领域，特别是涉及一种基于纳米探针C60的癌胚抗原(CEA)的电化学免疫传感器的构建方法。具体涉及一种金纳米簇作为抗体捕获基底，AuNPsL-cys-C60标记的第二抗体作为氧化还原探针的电化学免疫传感器的构建方法。
背景技术
CEA属于胚胎抗原中的一种，是一种正常成分，因其在胚胎发育阶段由胚胎组织产生。随着胚胎的生长，胚胎的后期胚胎抗原的含量减少，出生后会逐渐消失或仅存在极微量。当细胞癌变时，此类抗原可被重新合成，并且表达于肿瘤细胞表面，也可分泌到血液中，其含量与细胞恶性程度常常呈正相关，因此，临床诊断上常把CEA作为检测肿瘤的一个重要指标。目前测定CEA的免疫方法主要有酶联免疫分析，荧光免疫分析，放射免疫分析等。这些传统的免疫分析方法通常存在操作复杂，价格昂贵，不适合实时检测。电化学免疫传感器由于所需仪器设备简单，灵敏度高，检测速度快，成本低，尤其是满足实时检测的需要而备受人们的广泛关注。基于电化学传感器的优良性质本发明制备了一种基于纳米探针C60的CEA的电化学免疫传感器，以C60为电化学探针，通过抗原抗体之间高度的特异性结合实现对CEA的检测。
本发明中金纳米簇作为第一抗体捕获基底，由于其良好的生物相容性，优异的导电性和大的表面积，不仅可以负载更多的抗体，而且可以促进蛋白质和电极之间的电子传递。AuNPsL-cys-C60作为电化学检测时的氧化还原纳米探针用于第二抗体的标记，基于抗原抗体之间良好的特异性，该传感器用于检测CEA。在本发明中构建的电化学免疫传感器具有成本低，稳定性好，制备过程简单，灵敏度高等优点，有效克服了目前CEA检测方法的不足。
发明内容
本发明的目的之一是以AuNPsL-cys-C60为电化学氧化还原探针，构建了一种简单快速，稳定性好，灵敏度高的电化学免疫传感器。
本发明的目的之二是将该电化学免疫传感器用于CEA的检测。
本发明的技术方案为：
1.一种基于纳米探针C60的CEA的电化学免疫传感器的构建方法：
(1)用Al2O3抛光粉打磨直径为4mm的玻碳电极(GCE)，分别在乙醇和超纯水中超声清洗3min，氮气吹干；以10mL含有浓度为1.0mmoL/L的HAuCl4溶液为底液，以GCE为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为对电极在-0.8～0.6V电位范围内进行循环伏安扫描30圈后，将电极在0.1moL/L的KCl溶液中浸泡过夜，用PBS(pH7.4)缓冲液冲洗得到金纳米簇修饰玻碳电极(nano-Au/GCE)；
(2)取10μL1~2.5μg/mL的CEA第一抗体(Ab1)标准溶液滴涂到nano-Au/GCE表面，在4℃冰箱中孵育12h，用PBS(pH7.4)缓冲溶液冲洗除去物理吸附得到Ab1/nano-Au/GCE；
(3)取10μL质量分数为1~3%的牛血清白蛋白(BSA)溶液滴涂到Ab1/nano-Au/GCE表面，在37℃下孵育1h，以封闭非特异性结合位点，用PBS(pH7.4)缓冲溶液冲洗电极表面得到BSA/Ab1/nano-Au/GCE；
(4)将10μL0.1pg/mL~1.0ng/mL的一系列不同浓度的CEA标准溶液滴涂到BSA/Ab1/nano-Au/GCE表面用于与抗体特异性识别，在37℃下孵育60min，用PBS(pH7.4)缓冲溶液冲洗电极表面得到CEA/BSA/Ab1/nano-Au/GCE；
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