[发明专利]一种快速检测水体中小瓜虫的方法

摘要

本发明涉及一种快速检测水体中小瓜虫的方法，根据养殖水域大小，采集水样；水样进行处理后，提取水体中的总DNA；利用已知核苷酸序列IC‑ITS‑F 5'‑GTTCCCCTTGAACGAGGAATTC‑3'和IC‑ITS‑R 5'‑TTAGTTTCTTTTCCTCCGC‑3’作为引物进行PCR扩增，得到PCR产物，将上述PCR产物连接载体后转入大肠杆菌DH5α中进行克隆，利用DNAMAN6.0软件对测序结果进行比对后，查找小瓜虫与其它可测得的相似种之间的差异位点并设计出针对小瓜虫的巢氏PCR引物，利用引物对第一次PCR产物进行巢氏PCR，电泳检测结果显示，有小瓜虫可扩增出条带，即可完成检测。采用该方法十分简便高效的检测了水体中小瓜虫的存在情况，为及时进行水体处理，防止小瓜虫的爆发提供了有效途径，极具实用价值，值得推广。

主权项

1.一种快速检测水体中小瓜虫的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：根据养殖水域大小，采集水样；步骤2：将水样进行处理后，提取水体中的总DNA；步骤3：利用核苷酸序列IC‑ITS‑F 和IC‑ITS‑R 作为引物进行PCR扩增，得到PCR产物750bp，电泳检测；所述的引物核苷酸序列IC‑ITS‑F 和IC‑ITS‑R 分别为IC‑ITS‑F 5'‑GTTCCCCTTGAACGAGGAATTC‑3'和IC‑ITS‑R 5'‑TTAGTTTCTTTTCCTCCGC‑3’；步骤4：将上述PCR产物切胶回收，连接载体后转入大肠杆菌DH5α中进行克隆，并尽可能多的挑取单克隆个体进行测序；步骤5：利用DNAMAN6.0软件对测序结果进行比对，找出小瓜虫与测得的相似种之间的差异位点并设计出2对针对小瓜虫的巢氏PCR引物，具体如下：n‑IC1‑F：5’‑GGTGAACCTTCTGGACCGAGGT‑3’ ，n‑IC1‑R：5’‑ATTAAGATACATGATTCCTTTC‑3’ ，n‑IC2‑F：5’‑AATAAAATACCTTCATATGTCT‑3’ ，n‑IC1‑R：5’‑ATTAAGATACATGATTCCTTTC‑3’ ；步骤6：利用上述引物对步骤3得到的PCR产物进行巢氏PCR，直到电泳检测结果显示，有小瓜虫可扩增出条带，即可完成对水体中小瓜虫的检测。