[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1的方法有效
| 申请号： | 201610020877.6 | 申请日： | 2016-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN105506128B | 公开（公告）日： | 2018-10-16 |
| 发明（设计）人： | 张晶珠;毛瑜 | 申请（专利权）人： | 深圳市坤健创新药物研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 北京思创毕升专利事务所 11218 | 代理人： | 韦庆文 |
| 地址： | 518063 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供一种检测黄曲霉毒素B1的方法，该方法包括以下步骤：(1)将含有黄曲霉毒素B1的待测样品与黄曲霉毒素B1提取液混合，离心并抽提上清液；(2)将所述上清液与DNA传感器溶液、DNA聚合酶混合并孵育；(3)加入氯化血红素溶液，室温孵育后加入ABTS还原态无色底物和双氧水。利用本发明的方法测定黄曲霉毒素B1无需大型仪器设备，成本低。恒温反应，能够实现肉眼的定性检测，也能够实现定量检测，并且，无需荧光染料，大大降低了成本。 | ||
| 搜索关键词： | 黄曲霉毒素 上清液 种检测 双氧水 氯化血红素溶液 提取液混合 大型仪器 待测样品 定量检测 定性检测 恒温反应 室温孵育 无色底物 荧光染料 还原态 抽提 孵育 | ||
【主权项】：
1.一种检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将含有黄曲霉毒素B1的待测样品与黄曲霉毒素B1提取液混合，离心并抽提上清液；(2)将所述上清液与DNA传感器溶液、DNA聚合酶混合并孵育；(3)加入氯化血红素溶液、HEPES缓冲溶液，室温孵育后加入ABTS还原态无色底物和双氧水；其中，所述DNA传感器溶液包括DNA传感器、RCA反应液和dNTP溶液，所述DNA传感器由以下三部分组成：(1)DNA(A)：通过以下DNA序列5’端和3’端连接而成的环状DNA模板：5’‑ACTGATATTAACCCAACCCGCCCTACCCATTTCTTGTTTCGTATCATTGCGAATACCGTG‑3’；(2)DNA(B)：黄曲霉毒素B1核酸适配体，该核酸适配体具有如下核苷酸序列：5’‑GTTCCCGTGCTGTTGTCTCTCTGTGTCTGCACGGGTTCGCTAGGCCCACA‑3’；(3)DNA(C)：RCA引物，所述DNA(C)具有如下核苷酸序列中的至少一种：5’‑TAATATCAGTCACGGTATTCTTTTCCAGCACGGGAAC‑3’；5’‑TAATATCAGTCACGGTATTCTTTTCACAACAGCACGGGAAC‑3’；5’‑TAATATCAGTCACGGTATTCTTTTCAGAGACAACAGCACGGGAAC‑3’。
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