[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1的方法有效
| 申请号： | 201610020877.6 | 申请日： | 2016-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN105506128B | 公开（公告）日： | 2018-10-16 |
| 发明（设计）人： | 张晶珠;毛瑜 | 申请（专利权）人： | 深圳市坤健创新药物研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 北京思创毕升专利事务所 11218 | 代理人： | 韦庆文 |
| 地址： | 518063 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 黄曲霉毒素 上清液 种检测 双氧水 氯化血红素溶液 提取液混合 大型仪器 待测样品 定量检测 定性检测 恒温反应 室温孵育 无色底物 荧光染料 还原态 抽提 孵育 | ||
1.一种检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)将含有黄曲霉毒素B1的待测样品与黄曲霉毒素B1提取液混合，离心并抽提上清液；
(2)将所述上清液与DNA传感器溶液、DNA聚合酶混合并孵育；
(3)加入氯化血红素溶液、HEPES缓冲溶液，室温孵育后加入ABTS还原态无色底物和双氧水；
其中，所述DNA传感器溶液包括DNA传感器、RCA反应液和dNTP溶液，
所述DNA传感器由以下三部分组成：
(1)DNA(A)：通过以下DNA序列5’端和3’端连接而成的环状DNA模板：
5’-ACTGATATTAACCCAACCCGCCCTACCCATTTCTTGTTTCGTATCATTGCGAATACCGTG-3’；
(2)DNA(B)：黄曲霉毒素B1核酸适配体，该核酸适配体具有如下核苷酸序列：
5’-GTTCCCGTGCTGTTGTCTCTCTGTGTCTGCACGGGTTCGCTAGGCCCACA-3’；
(3)DNA(C)：RCA引物，所述DNA(C)具有如下核苷酸序列中的至少一种：
5’-TAATATCAGTCACGGTATTCTTTTCCAGCACGGGAAC-3’；
5’-TAATATCAGTCACGGTATTCTTTTCACAACAGCACGGGAAC-3’；
5’-TAATATCAGTCACGGTATTCTTTTCAGAGACAACAGCACGGGAAC-3’。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述DNA传感器溶液中DNA(A)、DNA(B)和DNA(C)的浓度均为10-1000nM。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述黄曲霉毒素B1提取液为甲醇溶液。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述DNA聚合酶为Phi29DNA聚合酶。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述待测样品与黄曲霉毒素B1提取液的重量比为1：1-1000。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述氯化血红素的终浓度为0.1-1μM；所述ABTS还原态无色底物的终浓度为1-5mM；所述双氧水的终浓度为0.05-0.2mM。
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