[发明专利]一种利用Caco-2细胞分析肠道可吸收乳清肽序列的方法

摘要

本发明公开了一种利用Caco-2细胞分析肠道可吸收乳清肽序列的方法，本发明利用具有特异性酶切位点的蛋白酶，包括碱性蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶分别酶解乳清蛋白，水解液通过超滤、Sephadex G-10凝胶过滤层析分离获得酶切位点、分子量、亲疏水性和静电荷各不相同的乳清肽；建立并验证Caco-2细胞后，以Caco-2细胞为肠道吸收模型进行乳清肽肠道转运实验，收集Caco-2细胞基底面(BL)侧转运出乳清肽，通过超高效液相质谱联用仪UPLC-MS分析鉴定转运出乳清肽氨基酸序列，分析可被小肠完整吸收转运的乳清肽序列特征。了解能被小肠完整吸收乳清肽序列后，可以筛选具有较好口服吸收利用度的多肽，拓展功能性食品及新药开发的领域。

主权项

一种利用Caco‑2细胞分析肠道可吸收乳清肽序列的方法，其特征在于包括以下步骤：a)利用具有特异性酶切位点的蛋白酶水解乳清蛋白；b)水解结束后酶解液加热灭酶活，离心取上清液为粗乳清肽(A)；c)步骤b)中的粗乳清肽(A)用截留分子量为10000Da的中空纤维超滤膜超滤，得到乳清肽超滤液(B)，冷冻干燥备用；d)步骤c)中的乳清肽超滤液(B)用蒸馏水溶解后，经过Sephadex G‑10凝胶过滤层析，收集各个分离组分得到纯化乳清肽(C)，冷冻干燥备用；e)构建Caco‑2细胞转运模型；f)步骤d)中分离得到的纯化乳清肽(C)进行Caco‑2细胞转运实验，收集Caco‑2细胞基底侧转运乳清肽(D)；g)步骤f)中Caco‑2细胞基底侧转运乳清肽(D)用UPLC‑MS分析肽序列。