[发明专利]一种人TSCM细胞的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种人TSCM细胞的制备方法，包括步骤：（1）在无菌条件下用血细胞分离机或注射器采集或者外周静脉血，经聚蔗糖-泛影葡糖胺密度梯度离心获得单个核细胞；（2）将上述分离的PBMCs置于含有刺激剂和细胞因子培养基内，调整细胞密度为（0.5～2）×106个/mL，转入细胞培养板、培养瓶或者培养袋内，于培养箱内培养；（3）细胞培养48-72小时后进行半量更换培养液并补加等量的培养液，以维持细胞密度为（0.5～2.0）×106个/mL;根据细胞的生长状态，第10～21天收获细胞。本发明利用抗CD3单抗和抗CD28单抗作为刺激剂，激活TSCM细胞，并联合细胞因子rh IL-7、rh IL-15和rh IL-2共同刺激，利用IM-12阻断干细胞分化培养TSCM细胞，使获得的细胞具有记忆细胞和干细胞的共同特性。从而为临床过继性免疫细胞治疗提供新的可选方案。

主权项

一种人TSCM细胞的制备方法，包括步骤：（1）在无菌条件下用血细胞分离机或50mL注射器采集或者外周静脉血，经聚蔗糖‑泛影葡糖胺密度梯度离心获得单个核细胞；（2）将上述分离的PBMCs置于含有刺激剂和细胞因子为1‑500ng/mL rh IL‑7、1‑500 ng/mL rh IL‑15、10‑1500IU rh IL‑2、1‑50ng/mL抗CD3单抗、5‑300ng/mL 抗CD28单抗、0.05‑50μM IM‑12和1‑10%自体血浆的RPMI 1640、OpTmizer、AIM‑V、SCGM或GT‑T551培养基内，调整细胞密度为（0.5～2）×106个/mL，转入细胞培养板、培养瓶或者培养袋内，于培养箱内培养；（3）细胞培养48‑72小时后进行半量更换培养液并补加等量的1‑500ng/mL rh IL‑7、1‑500 ng/mL rh IL‑15、10‑1500IU rh IL‑2以及0.05‑50μM IM‑12，以后根据细胞生长状态每2～3天进行补加含有等量1‑500ng/mL rh IL‑7、1‑500 ng/mL rh IL‑15、10‑1500IU rh IL‑2以及0.05‑50μM IM‑12的培养液，以维持细胞密度为（0.5～2.0）×106个/mL;根据细胞的生长状态，第10～21天收获细胞。