[发明专利]一种人TSCM细胞的制备方法及应用

权利要求书

1.一种人TSCM细胞的制备方法，包括步骤：

（1）在无菌条件下用血细胞分离机或50mL注射器采集或者外周静脉血，经聚蔗糖-泛影 葡糖胺密度梯度离心获得单个核细胞；

（2）将上述分离的PBMCs置于含有刺激剂和细胞因子为1-500ng/mLrhIL-7、1-500 ng/mLrhIL-15、10-1500IUrhIL-2、1-50ng/mL抗CD3单抗、5-300ng/mL抗CD28单抗、 0.05-50μMIM-12和1-10%自体血浆的RPMI1640、OpTmizer、AIM-V、SCGM或GT-T551培养基 内，调整细胞密度为（0.5～2）×106个/mL，转入细胞培养板、培养瓶或者培养袋内，于培养 箱内培养；

（3）细胞培养48-72小时后进行半量更换培养液并补加等量的1-500ng/mLrhIL-7、1- 500ng/mLrhIL-15、10-1500IUrhIL-2以及0.05-50μMIM-12，以后根据细胞生长状态 每2～3天进行补加含有等量1-500ng/mLrhIL-7、1-500ng/mLrhIL-15、10-1500IUrh IL-2以及0.05-50μMIM-12的培养液，以维持细胞密度为（0.5～2.0）×106个/mL;

根据细胞的生长状态，第10～21天收获细胞。

2.根据权利要求1所述一种简单高效制备人TSCM的方法，其特征在于所述刺激PBMCs过 程中采用的刺激剂和细胞因子的浓度分别为：50-1500IU/mLrhIL-2、1-50ng/mLIL-7、1- 50ng/mLIL-15、0.05-50μMIM-12、1-50μg/mL抗CD3单抗、5-300ng/mL抗CD28单抗，自体血 浆浓度为1-10%，细胞的起始密度为（0.5～2）×106个/mL。

3.根据权利要求2所述人TSCM细胞的制备方法，其特征在于，所述rhIL-2浓度为 300IU/mL。

4.根据权利要求2所述人TSCM细胞的制备方法，其特征在于，所述rhIL-7浓度为25ng/ mL。

5.根据权利要求2所述人TSCM细胞的制备方法，其特征在于，所述rhIL-15浓度为 25ng/mL。

6.根据权利要求2所述人TSCM细胞的制备方法，其特征在于，所述IM-12浓度为2μg/mL。

7.根据权利要求2所述人TSCM细胞的制备方法，其特征在于，所述抗CD3单抗浓度为 30ng/mL。

8.根据权利要求2所述人TSCM细胞的制备方法，其特征在于，所述抗CD28单抗浓度为 100ng/mL。

9.根据权利要求1-7所述人TSCM细胞的制备方法，其特征在于，所制备的人TSCM细胞用 于肿瘤的治疗药物。