[发明专利]提高浒苔多糖生物活性的方法

摘要

本发明公开了一种提高浒苔多糖生物活性的方法，包括以下步骤：将浒苔粗多糖(EP)通过氧化氢-维生素C联合法进行降解，得到降解浒苔多糖(DEP)；以氯乙酸为羧甲基化试剂，与降解浒苔多糖反应制备羧甲基化浒苔多糖(CDEP)；在1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)存在下，CDEP与羟胺偶联，得到异羟肟酸化降解浒苔多糖(HCDEP)。本发明的HCDEP具有较低分子量(30～13kDa)，其铁螯合容量为0.2～1.2mmol/g。本发明的HCDEP具有较高的体外抗氧化活性和抗菌活性。

主权项

提高浒苔多糖生物活性的方法，其特征是包括以下步骤：1)、降解：将浒苔粗多糖溶于蒸馏水配成浓度为1～20mg/mL的浒苔粗多糖溶液，升温至30～50℃后分别加入过氧化氢和维生素C，直至过氧化氢和维生素C的终浓度均为6～12mmol/L；然后保温搅拌进行降解反应2～4h，从而实现对浒苔粗多糖进行降解；将所得的反应液浓缩至为原体积的1/2～1/4，得浓缩液；用4倍浓缩液体积的体积浓度为95％乙醇沉淀，于3～5℃静置10～12h，离心，取沉淀用水进行复溶，所述沉淀与水的用量比为18～22mg/ml，用截留分子量为3500Da的透析袋透析46～50h，将所得的透析液冷冻干燥，得到降解浒苔多糖；2)、羧甲基化：将0.3g的降解浒苔多糖溶于12.5ml二甲基亚砜中，室温下搅拌1.5～2.5h；然后加入质量浓度20％氢氧化钠溶液5ml，于35～45℃搅拌2.5～3.5h，得反应液Ⅰ；将氯乙酸溶于12.5ml二甲基亚砜和质量浓度20％氢氧化钠溶液5ml中，配制得浓度为2～6mol/L的氯乙酸溶液，作为反应液Ⅱ；将反应液Ⅱ与上述反应液Ⅰ等体积混合，然后于45～65℃反应2～6小时；将所得的反应液冷却至室温，调节pH至中性，加水稀释，然后用3500Da的透析袋透析46～50h，将透析液浓缩至原体积的1/2～1/4，冷冻干燥，得到即羧甲基化降解浒苔多糖；3)、与羟胺偶联：将羧甲基化降解浒苔多糖溶于蒸馏水中配制成浓度为1～3g/100ml的羧甲基化降解浒苔多糖溶液，调节pH至4.0～4.5，然后加入EDC·HCl，搅拌1.5～2.5h，再加入盐酸羟胺和4‑二甲氨基吡啶，继续搅拌1.5～2.5h，调节pH至5.8～6.2，室温搅拌1.5～2.5h，再调节pH至8.8～9.2，继续室温搅拌22～26h；EDC·HCl与羧甲基化降解浒苔多糖中羧甲基的摩尔比为1～4:3，盐酸羟胺与EDC·HCl的摩尔比为5.5～6:1，4‑二甲氨基吡啶的摩尔量为EDC·HCl的5～15.5％；EDC·HCl代表1‑乙基‑3‑(3‑二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐；将所得的反应液旋蒸浓缩至为原体积的1/2～1/4，得浓缩液；用4倍浓缩液体积的体积浓度95％乙醇沉淀，于3～5℃静置10～12h，离心取沉淀，用乙醇洗涤沉淀，用水复溶，所述沉淀与水的用量比为18～22mg/ml，用截留分子量为3500Da透析袋透析46～50h，将透析液浓缩至原体积的1/2～1/4，冷冻干燥，得到异羟肟酸化降解浒苔多糖。