[发明专利]提高浒苔多糖生物活性的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学化工技术领域，涉及一种通过对降解浒苔多糖进行异羟肟酸化修饰从而 增强其生物活性的方法。

背景技术

浒苔是我国东南沿海的一种大型经济性绿藻，资源丰富，本身可以食用，并含有多种活 性物质，如浒苔多糖，脂类色素，酚类等。据文献报道，浒苔多糖具有提高哺乳动物免疫力、 降血脂、消炎抗菌以及抗氧化等生理功能。因此将浒苔开发成功能食品有很好的前景。浒苔 水提多糖主要为水溶性的硫酸多糖，分子量大，生物活性相对较低。如果将其降解成分子量 相对较小的产物，则由于游离出更多的活性基团，则可能会使其生物活性得到提高。另外， 通过化学修饰在多糖分子中引入一些功能基也能使多糖的生物得到提高。已有文献报道了浒 苔多糖的硫酸化、磷酸化和乙酰化修饰，经修饰之后的浒苔多糖的抗氧化活性显著提高；也 有报道浒苔多糖经硒化后提高抗菌活性，但尚未有同时提高浒苔多糖抗菌和抗氧化活性的方 法报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是一种能提高浒苔多糖的抗氧化、抗菌等生物活性的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种将降解的浒苔多糖进行异羟肟酸化修饰的方法； 包括以下步骤：

(1)将浒苔粗多糖(EP)通过氧化氢-维生素C联合法进行降解。通过研究反应温度、 维生素C以及过氧化氢浓度和反应时间对降解产物的总抗氧化能力的影响，得到最佳的降解 反应条件。将水解液经浓缩、醇沉、离心、透析、冷冻干燥，得到粉末状的降解浒苔多糖(DEP)。

(2)以氯乙酸为羧甲基化试剂，与降解浒苔多糖反应制备羧甲基化浒苔多糖(CDEP)。 研究反应温度、氯乙酸浓度和反应时间对产物的羧甲基取代度的影响，并通过响应面试验进 一步优化反应条件。在经优化后的反应条件下得到羧甲基化浒苔多糖(CDEP)用于下一步反 应。

(3)在1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)存在下，CDEP与羟胺偶联，得 到异羟肟酸化降解浒苔多糖(HCDEP)。

本发明的方案具体如下，一种提高浒苔多糖生物活性的方法，包括以下步骤：

1)、降解：

将浒苔粗多糖(EP)溶于蒸馏水配成浓度为1～20mg/mL的浒苔粗多糖溶液，升温至 30～50℃后分别加入过氧化氢和维生素C，直至过氧化氢和维生素C的终浓度均为6～12mmol/L (例如为9mmol/L)；然后保温搅拌进行降解反应2～4h，从而实现对浒苔粗多糖进行降解；

将所得的反应液浓缩至为原体积的1/2～1/4(约1/3)，得浓缩液；用4倍浓缩液体积的体积 浓度为95％乙醇沉淀，于3～5℃静置10～12h(4℃、过夜)，离心(8000rpm,20min)，取沉 淀用水进行复溶，所述沉淀与水的用量比为18～22mg/ml(例如约为20mg/ml)，用截留分子量 为3500Da的透析袋透析46～50h(例如48h)，将所得的透析液冷冻干燥，得到降解浒苔多糖 (DEP，为粉末状)；

备注说明：降解浒苔多糖(DEP)不具备抗菌活性；

2)、羧甲基化：

将0.3g的降解浒苔多糖(DEP，为粉末状)溶于12.5ml二甲基亚砜(DMSO)中，室温 下搅拌1.5～2.5h；然后加入质量浓度20％氢氧化钠溶液5ml，于35～45℃搅拌2.5～3.5h，得反应 液Ⅰ；

将氯乙酸溶于12.5ml二甲基亚砜(DMSO)和质量浓度20％氢氧化钠溶液5ml中，配制得 浓度为2～6mol/L(较佳浓度为4mol/L)的氯乙酸溶液，作为反应液Ⅱ；将反应液Ⅱ与上述反 应液Ⅰ等体积混合(注：从而使得到的反应液中氯乙酸终浓度为1～3mol/L，较佳为2mol/L)， 然后于45～65℃反应2～6小时(较佳为55℃反应4小时)；

将所得的反应液冷却至室温，调节pH至中性(可用0.5mol/L的HCl进行调节pH，中性， 即，pH＝7.0)，加水稀释(水与反应液的体积比约为1：1)，然后用3500Da的透析袋透析46～50h (例如48h)，将透析液浓缩至原体积的1/2～1/4(例如1/3)，冷冻干燥，得到即羧甲基化降解 浒苔多糖(CDEP，即，白色粉末状的羧甲基化衍生物)；

3)、与羟胺偶联：