[发明专利]一种磁珠法提取游离核酸的方法及其试剂盒

摘要

本发明涉及一种磁珠法提取游离核酸的方法，于200ul样本中加入300ul裂解结合液和20ul磁性纳米颗粒，混合后进行第一次磁分离处理，弃去第一次磁分离处理后的上清液，然后加入0.5-1ml洗涤液，混合后进行第二次磁分离处理，弃去第二次磁分离处理后的上清液，然后加入40-100ul洗脱液，混合后静置5-10min，所述静置的温度为20-65℃，然后进行第三次磁分离处理，取第三次磁分离处理后的上清液，即获得所述游离核酸。本发明还涉及一种磁珠法提取游离核酸的试剂盒。本发明的磁珠法提取游离核酸的方法具有操作简便、提高提取效率和提取纯度、增大样本量并适用于片段长度短的核酸的提取的优点。

主权项

一种磁珠法提取游离核酸的方法，其特征在于，于0.2‑5ml样本中加入0.3‑7.5ml裂解结合液和20‑40ul磁性纳米颗粒，混合后进行第一次磁分离处理，弃去第一次磁分离处理后的上清液，然后加入0.5‑1ml洗涤液，混合后进行第二次磁分离处理，弃去第二次磁分离处理后的上清液，然后加入40‑100ul洗脱液，混合后静置5‑10min，所述静置的温度为20‑65℃，然后进行第三次磁分离处理，取第三次磁分离处理后的上清液，即获得所述游离核酸；所述裂解结合液包括0.5‑6M的A试剂、0.5‑10％体积浓度的B试剂、10‑50％体积浓度的C试剂混合制得，所述A试剂为异硫氰酸胍、盐酸胍、碘化钠和高氯酸钠中的至少一种，所述B试剂为tween20、triton‑X100、SDS和NP40中的至少一种，所述C试剂为异丙醇和无水乙醇中的至少一种，所述裂解结合液的pH值为5‑7；所述洗涤液包括0.5‑3M的D试剂和10‑70％体积浓度的E试剂混合制得，所述D试剂为异硫氰酸胍、盐酸胍和高氯酸钠中的至少一种，所述E试剂为异丙醇和无水乙醇中的至少一种，所述洗涤液的pH值为5‑7。