[发明专利]间充质干细胞分泌的外泌体在制备防治丙型肝炎病毒药物中的应用

摘要

本发明属于生物技术领域，提供了间充质干细胞来源的外泌体在制备防治丙型肝炎病毒(HCV)药物中的应用。本发明的外泌体主要通过以下方法制备：分离培养的人间充质干细胞；条件培养基的收集；外泌体的提取、浓缩和纯化。本发明通过体外建立的细胞来源的丙型肝炎病毒(HCVcc)模型、HCV易感靶细胞人肝癌细胞系Huh7，对人间充质干细胞来源的外泌体的抗HCV活性进行了检测。实验结果显示，人脐带、骨髓以及外周血来源间充质干细胞分泌的外泌体具有显著的抗HCV活性，能显著抑制病毒RNA在细胞中的水平，同时实验数据提示，外泌体处理后的细胞均明显上调具有抗病毒活性的4种microRNAs(Let‑7f,miR‑145,miR‑199a and miR‑221)。本发明为抗HCV治疗提供了新的来源和方法。

主权项

1.间充质干细胞分泌的外泌体在制备防治丙型肝炎病毒药物中的应用；所述的外泌体的制备方法如下：A．脐带间充质干细胞的分离及培养与传代；B．间充质干细胞传代培养后用去除了外泌体血清的干细胞培养基进行培养，48‑96h后收取培养上清液，及储备；C．外泌体的提取、浓缩与纯化：步骤B中收取48‑96h的培养上清液作为条件培养基，依次在4℃、500g、10min及4℃、2000g、10min条件下离心去除杂质；随后条件培养基通过0.22μm滤膜过滤；将过滤后的液体在4℃、10⁵×g、180min进行超速离心，得到含有间充质干细胞分泌的外泌体沉淀，加入200μl PBS洗涤；再次4℃、10⁵×g、120min超速离心，即得纯化的外泌体。