[发明专利]间充质干细胞分泌的外泌体在制备防治丙型肝炎病毒药物中的应用

权利要求书

1.间充质干细胞分泌的外泌体在制备防治丙型肝炎病毒药物中的应用；所述的外泌体的制备方法如下：

A．脐带间充质干细胞的分离及培养与传代；

B．间充质干细胞传代培养后用去除了外泌体血清的干细胞培养基进行培养，48-96h后收取培养上清液，及储备；

C．外泌体的提取、浓缩与纯化：

步骤B中收取48-96h的培养上清液作为条件培养基，依次在4℃、500g、10min及4℃、2000g、10min条件下离心去除杂质；随后条件培养基通过0.22μm滤膜过滤；将过滤后的液体在4℃、10⁵×g、180min进行超速离心，得到含有间充质干细胞分泌的外泌体沉淀，加入200μl PBS洗涤；再次4℃、10⁵×g、120min超速离心，即得纯化的外泌体。

2.根据权利要求1所述的间充质干细胞分泌的外泌体在制备防治丙型肝炎病毒药物中的应用，其特征在于，所述的步骤A为：

将获得的新鲜脐带，经DMEM反复冲洗后，浸泡于含有1%青霉素与链霉素的L-DMEM中；10分钟后取出将其用组织剪剪成1mm的组织块；将组织块放入含有10％胎牛血清的L-DMEM培养基中，5％CO₂、37℃、95%湿度条件下进行培养；1周后可见脐带间充质干细胞爬出生长，将组织块去除，以0.25％胰蛋白酶消化细胞进行传代培养。

3.根据权利要求1或2所述的间充质干细胞分泌的外泌体在制备防治丙型肝炎病毒药物中的应用，其特征在于，所述的步骤B为：

间充质干细胞用去除了外泌体血清的干细胞培养基进行培养，48-96h后收取培养上清液，可暂存于-80℃冰箱，待收集的培养上清到一定体积后进行外泌体的抽提。

4.根据权利要求1或2所述的间充质干细胞分泌的外泌体在制备防治丙型肝炎病毒药物中的应用，其特征在于，所述的药物是抗丙型肝炎病毒药物。

5.间充质干细胞分泌的外泌体在制备保肝或预防丙型肝炎病毒感染的食品或保健品中的应用；所述的外泌体的制备方法如下：

A．脐带间充质干细胞的分离及培养与传代；

B．间充质干细胞传代培养后用去除了外泌体血清的干细胞培养基进行培养，48-96h后收取培养上清液，及储备；

C．外泌体的提取、浓缩与纯化：

步骤B中收取48-96h的培养上清液作为条件培养基，依次在4℃、500g、10min及4℃、2000g、10min条件下离心去除杂质；随后条件培养基通过0.22μm滤膜过滤；将过滤后的液体在4℃、10⁵×g、180min进行超速离心，得到含有间充质干细胞分泌的外泌体沉淀，加入200μl PBS洗涤；再次4℃、10⁵×g、120min超速离心，即得纯化的外泌体。