[发明专利]间充质干细胞分泌的外泌体在制备防治丙型肝炎病毒药物中的应用

说明书

本发明属于生物技术领域，提供了间充质干细胞来源的外泌体在制备防治丙型肝炎病毒(HCV)药物中的应用。本发明的外泌体主要通过以下方法制备：分离培养的人间充质干细胞；条件培养基的收集；外泌体的提取、浓缩和纯化。本发明通过体外建立的细胞来源的丙型肝炎病毒(HCVcc)模型、HCV易感靶细胞人肝癌细胞系Huh7，对人间充质干细胞来源的外泌体的抗HCV活性进行了检测。实验结果显示，人脐带、骨髓以及外周血来源间充质干细胞分泌的外泌体具有显著的抗HCV活性，能显著抑制病毒RNA在细胞中的水平，同时实验数据提示，外泌体处理后的细胞均明显上调具有抗病毒活性的4种microRNAs(Let‑7f,miR‑145,miR‑199a and miR‑221)。本发明为抗HCV治疗提供了新的来源和方法。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，是间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)中的外泌体提取制备的方法及其在防治丙型肝炎病毒中的应用。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是具有治疗效果的一种前体祖细胞(Jung Y,Bauer G,Nolta JA.Concise review:Induced pluripotent stem cell-derived mesenchymal stem cells:progress toward safe clinical products.Stemcells.2012；30:42-47)。报道显示，它能缓解炎症，调节免疫反应及促进组织再生(Shi M,Zhang Z,Xu R,et al.Human mesenchymal stem cell transfusion is safe andimproves liver function in acute-on-chronic liver failure patients.Stem cellstranslational medicine.2012；1:725-731)。目前，MSC作为治疗方法已经进入两个2/3期和四个3期临床试验中。人脐带间充质干细胞是通过非侵入手段从人脐带组织中获得的，具有可长期传代特性的MSC(Chen W,Liu J,Manuchehrabadi N,et al.Umbilical cord andbone marrow mesenchymal stem cell seeding on macroporous calcium phosphatefor bone regeneration in rat cranial defects.Biomaterials.2013；34:9917-9925)。人骨髓、外周血分离的MSC也是通过医疗过程中，从剩余的医疗样本中所提取的细胞。