[发明专利]一种提高家蚕蛹体重量的方法

摘要

本发明公开了一种提高家蚕蛹体重量的方法。从五龄家蚕丝腺中提取总RNA，逆转录获得第1链cDNA，并以其为模板Rt-PCR扩增，克隆获得BmCrzR cDNA，并以其为模板PCR扩增，酶切后将DNA片段连接载体获得pFLAG-BmCrzR，再以其为模板PCR扩增获得反应模板，将反应模板与T7反应缓冲液、ATP液、CTP液、GTP液、UTP溶液和T7酶混合反应并进一步处理得到BmCrzR dsRNA；最终将BmCrzR dsRNA注射入五龄家蚕幼虫腹部，桑叶饲养至成熟结茧，家蚕蛹体体重增加。本发明提高家蚕蛹体重量的方法，是不增加蚕食桑量通过调控家蚕代谢来实现的，这对于研究家蚕的物质与能量代谢机制、进一步提高家蚕生理机能等，具有积极作用。

主权项

一种提高家蚕蛹体重量的方法，其特征在于：1)解剖并收集五龄第3‑4天的家蚕丝腺，从中提取总RNA，然后逆转录获得第1链cDNA；2)以第1链cDNA为模板，通过逆转录聚合酶链式反应(RT‑PCR)扩增，克隆获得家蚕Corazonin受体(BmCrzR)cDNA；3)再以BmCrzR cDNA为模板，通过PCR扩增得到BmCrzR DNA片段，琼脂糖凝胶电泳回收目的DNA片段，经HindIII/BamHI酶切后，与哺乳动物表达载体pFlag‑CMV‑3'连接，获得pFLAG‑BmCrzR；4)以pFLAG‑BmCrzR为模板，通过PCR扩增得到pFLAG‑BmCrzR DNA片段，琼脂糖凝胶电泳回收得到纯化的大小为893bp的目的DNA片段，作为反应模板；5)将反应模板与10×T7反应缓冲液、ATP液、CTP液、GTP液、UTP溶液、T7酶混合进行反应，然后再进行多次处理得到BmCrzR dsRNA；6)给五龄第2‑3天家蚕幼虫腹部注射10‑20μg BmCrzR dsRNA，用桑叶饲养至成熟结茧，获得重量增加的家蚕蛹体。