[发明专利]一种玉米灌浆前期胚乳特异型启动子的筛选与鉴定方法在审
| 申请号： | 201510818713.3 | 申请日： | 2015-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN105420356A | 公开（公告）日： | 2016-03-23 |
| 发明（设计）人： | 黄玉碧;张军杰;陈江;刘汉梅;胡育峰;刘应红;余国武 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/34 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 裴娜 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种玉米灌浆前期胚乳特异型启动子的筛选与鉴定方法，包括筛选并克隆在灌浆前期玉米胚乳中高效表达的基因启动子；对候选基因的表达特性进行鉴定，筛选出目的基因betl2，克隆其启动子pbetl2；构建瞬时表达载体；采用基因枪法轰击玉米不同组织，分析pbetl2驱动GUS基因的表达情况；通过玉米叶片原生质体转化观察启动子控制GFP基因在叶片中的表达情况；对启动子在灌浆前期、中期及晚期的表达情况进行分析。本发明克隆到玉米灌浆前期特异启动子pbetl2，为灌浆前期代谢活动的人工修饰研究胚乳发育相关机理具有重要理论意义，同时为利用基因工程技术，特异在玉米灌浆前期进行基因表达具有重要的现实意义。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 玉米 灌浆 前期 胚乳 异型 启动子 筛选 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
一种玉米灌浆前期胚乳特异型启动子的筛选与鉴定方法，其特征在于，所述的玉米灌浆前期胚乳特异型启动子的筛选与鉴定方法包括：利用玉米全基因组芯片表达数据，筛选并克隆在灌浆前期玉米胚乳中高效表达的基因启动子；采用实时荧光定量PCR对候选基因的表达特性进行鉴定，筛选出目的基因betl2，克隆启动子pbetl2；使用PlantCARE对克隆的启动子序列做顺式作用元件分析，同时构建瞬时表达载体；采用基因枪法轰击玉米不同组织，利用GUS组织化学染色法分析pbetl2驱动GUS基因的表达情况；通过玉米叶片原生质体转化观察启动子控制GFP基因在叶片中的表达情况；对启动子在灌浆前期、中期及晚期的表达情况进行分析，并测定启动子活性。
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