[发明专利]一种快速检测茶树中茶氨酸和谷氨酰胺水解酶活力的方法在审
| 申请号： | 201510770602.X | 申请日： | 2015-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN105277649A | 公开（公告）日： | 2016-01-27 |
| 发明（设计）人： | 李勤;刘仲华;黄建安;林海燕;张振乾 | 申请（专利权）人： | 湖南农业大学 |
| 主分类号： | G01N30/90 | 分类号： | G01N30/90 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 410128 湖南省长沙市*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种检测茶树中茶氨酸水解酶和谷氨酰胺水解酶活力的方法，包括：(1)粗酶液的制备；(2)粗酶液中蛋白质含量P的检测；(3)将粗酶液加入茶氨酸溶液或谷氨酰胺溶液得到水解反应体系样品，反应完成后离心，取上清液；(4)利用高效薄层色谱检测上清液中水解反应产物谷氨酸的吸光值，代入线性方程，计算得到谷氨酸的浓度N，进而计算得到谷氨酸含量M、茶氨酸水解酶活力或谷氨酰胺水解酶活力。本发明所述方法具有高通量、效率高的特点，为研究茶树体内茶氨酸代谢、茶氨酸水解酶和谷氨酰胺水解酶的分离纯化、酶蛋白的基因克隆及其功能验证奠定了坚实的实验技术基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 茶树 氨酸 谷氨酰胺 水解 活力 方法 | ||
【主权项】：
一种检测茶树中茶氨酸和谷氨酰胺水解酶酶活力的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)粗酶液的制备；(2)粗酶液中蛋白质含量P的检测；(3)将步骤(1)制得的粗酶液平分，一份粗酶液加入茶氨酸溶液或谷氨酰胺溶液得到水解反应体系样品，反应完成后离心，取上清液；另一份粗酶液经处理作为对照液；(4)利用高效薄层色谱检测上清液中水解反应产物谷氨酸的吸光值，代入线性方程，计算得到谷氨酸的浓度N，进而计算得到谷氨酸含量M、茶氨酸水解酶活力或谷氨酰胺水解酶活力；其中：谷氨酸含量M＝谷氨酸浓度N×水解反应体系样品的体积V；茶氨酸水解酶活力或谷氨酰胺水解酶活力＝M/水解时间(min)/P。
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