[发明专利]一种胎盘源壁蜕膜间充质干细胞分离冷冻的制备方法

摘要

本发明提供一种胎盘源壁蜕膜间充质干细胞分离冷冻的制备方法，本发明制备方法在胎盘采集前对产妇进行筛选，以符合条件的健康足月产妇志愿者，最终选择男婴作为采集目标，之后进行分离扩增进行规模化培养直至第三代，进行冷冻保存，对分离过程及冷冻过程的中间品进行一系列质量检测包括母源检测，冷冻后细胞复苏洗涤待用，活率无明显降低，细胞生物学功能完整。本发明获得的胎盘源壁蜕膜间充质干细胞成分单一，又拟从原料采集开始直至细胞制备完成的全过程进行临床级、统一、系统监控，以实现间充质干细胞的临床标准产品，再者壁蜕膜从起源上来自于母亲，更加适合母亲自体使用。

主权项

一种胎盘源壁蜕膜间充质干细胞分离冷冻的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：A、壁蜕膜分离：将分离获得的胎盘用生理盐水清洗后，剥离壁蜕膜，并将撕下的壁蜕膜剪成小块；B、使用胶原酶对壁蜕膜进行消化；C、间充质干细胞原代培养：将消化后的壁蜕膜进行过滤，洗涤后得间充质干细胞，将间充质干细胞在完全培养基中培养；细胞密度达约8000‑9000个/cm²，此后每3天换液一次，至细胞融合度达80％以上时，用胰蛋白酶消化传代，用原培养上清终止；D、间充质干细胞传代培养：传代时，传代细胞接种密度约为8000‑9000个/cm²；3天后，细胞密度达80％以上，再次传代；传至第三代，收集细胞并计数和活率，进行冷冻保存；E、胎盘源壁蜕膜间充质干细胞使用：取出冷冻细胞，复苏，复苏后洗涤，统计细胞数和细胞活率，根据计数结果按临床需要将细胞和人白蛋白溶液混匀待用；并留样进行内毒素和细菌检测。