[发明专利]一种虎斑兜兰组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种虎斑兜兰组培快繁方法，属于植物组织培养研究领域。本方法包括如下步骤：（1）外植体灭菌，（2）种子萌发培养，（3）增殖培养，（4）分化培养，（5）生根培养，（6）炼苗移栽。适时采集虎斑兜兰蒴果，灭菌后将种子撒播到无菌萌发培养基上萌发，在不同培养阶段采用不同的培养基配方进行培养，然后通过炼苗和移栽得到健康、遗传性状稳定的优质种苗，本方法繁殖系数高，繁殖周期短，移栽成活率达92%以上，能够进行大规模商品化育苗生产，有利于虎斑兜兰野生资源的保护与开发，具有广泛的应用前景。

主权项

一种虎斑兜兰组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：（1）外植体灭菌：人工授粉140d后，采集未开裂的蒴果作为外植体，用75%酒精灭菌30～50s，再用10%次氯酸钠灭菌10～15min，无菌水冲洗5～7次；（2）种子萌发培养：在无菌条件下将灭菌后的蒴果切开，将种子均匀撒播在种子萌发培养基上，在温度25±2℃，光照14 h/d，光照强度1600～2000Lx条件下培养7～8周，种子发育成原球茎，所述的种子萌发培养基为1/2RE+6‑BA0.6mg/L+AC1.0g/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，PH为6.0～6.5；（3）增殖培养：将原球茎转接到增殖培养基，在温度25±2℃，光照14 h/d，光照强度1600～2000Lx条件下培养8～9周，得到类原球茎和芽的混合体，所述的增殖培养基为：1/2MS+6‑BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+胰蛋白胨3g/L+AC1.0g/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，PH为6.0～6.5；（4）分化培养：将增殖培养得到的混合体转接到分化培养基，在温度25±2℃，光照14 h/d，光照强度1600～2000Lx条件下培养7～8周，得到具有1～2片叶的小苗，所述的分化培养基为：1/2MS+6‑BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+鲜枣汁80ml/L+AC1.0g/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，PH为6.0～6.5；（5）生根培养：将小苗转入生根培养基，在温度25±2℃，光照14 h/d，光照强度2000～2500Lx条件下培养7～8周，得到根长3～4cm的试管苗，所述的生根培养基为：1/2MS+IBA0.3mg/L+NAA0.5mg/L+鲜枣汁80ml/L+AC1.0g/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，PH为6.0～6.5；（6）炼苗移栽：将试管苗带瓶移至常温、无直射光环境下，炼苗1周，取出试管苗，用清水洗净培养基，用浸泡过的水苔包裹根部栽到营养杯中，环境要求通风良好，遮光65%～70%，空气相对湿度70%～75%，温度15～28℃，2周后试管苗即可成活。