[发明专利]一种虎斑兜兰组培快繁方法

权利要求书

1.一种虎斑兜兰组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）外植体灭菌：人工授粉140d后，采集未开裂的蒴果作为外植体，用75%酒精灭菌30～50s，再用10%次氯酸钠灭菌10～15min，无菌水冲洗5～7次；

（2）种子萌发培养：在无菌条件下将灭菌后的蒴果切开，将种子均匀撒播在种子萌发培养基上，在温度25±2℃，光照14h/d，光照强度1600～2000Lx条件下培养7～8周，种子发育成原球茎，所述的种子萌发培养基为1/2RE+6-BA0.6mg/L+AC1.0g/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，PH为6.0～6.5；

（3）增殖培养：将原球茎转接到增殖培养基，在温度25±2℃，光照14h/d，光照强度1600～2000Lx条件下培养8～9周，得到类原球茎和芽的混合体，所述的增殖培养基为：1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+胰蛋白胨3g/L+AC1.0g/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，PH为6.0～6.5；

（4）分化培养：将增殖培养得到的混合体转接到分化培养基，在温度25±2℃，光照14h/d，光照强度1600～2000Lx条件下培养7～8周，得到具有1～2片叶的小苗，所述的分化培养基为：1/2MS+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+鲜枣汁80ml/L+AC1.0g/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，PH为6.0～6.5；

（5）生根培养：将小苗转入生根培养基，在温度25±2℃，光照14h/d，光照强度2000～2500Lx条件下培养7～8周，得到根长3～4cm的试管苗，所述的生根培养基为：1/2MS+IBA0.3mg/L+NAA0.5mg/L+鲜枣汁80ml/L+AC1.0g/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L，PH为6.0～6.5；

（6）炼苗移栽：将试管苗带瓶移至常温、无直射光环境下，炼苗1周，取出试管苗，用清水洗净培养基，用浸泡过的水苔包裹根部栽到营养杯中，环境要求通风良好，遮光65%～70%，空气相对湿度70%～75%，温度15～28℃，2周后试管苗即可成活。