[发明专利]从胎盘胎儿面绒毛膜中提取亚全能干细胞的方法

摘要

本发明涉及一种从胎盘胎儿面绒毛膜中提取亚全能干细胞的方法。该方法包括以下步骤：将胎盘去除羊膜和瘀血后，反复冲洗胎盘表面进行消毒处理；剪取胎儿面绒毛膜于玻璃皿中，尽量剔除表面残留的胎盘小叶组织，剪碎至小块；使用网，用大量生理盐水冲洗组织小块，去除其中残留的血细胞；组织消化：使用混合酶，在恒温摇床振荡消化；消化结束后加适量FBS终止，滤网过滤，加大量生理盐水冲洗滤渣，获得尽量多的细胞；离心，弃上清，加盐水洗涤，离心，得单核细胞；磁珠分选(OCT‑4阳性、Nanog阳性和STRO‑1阴性)，获得目标细胞。本发明还涉及该方法获得的亚全能干细胞以及它们的制药用途。这些亚全能干细胞具有优异的特点。

主权项

1.从胎盘胎儿面绒毛膜中提取干细胞的方法，该方法包括以下步骤：(1)从采集盒中取出胎盘置于白瓷盘中，去除羊膜和瘀血后，使用生理盐水反复冲洗胎盘表面，进行消毒处理；(2)转移至新白瓷盘中，剪取胎儿面绒毛膜置于100mm玻璃皿中，尽量剔除表面残留的胎盘小叶组织，剪碎至0.5mm3~1.5mm3的小块；(3)使用300目筛网，用大量生理盐水冲洗组织小块，去除其中残留的血细胞；(4)组织消化：使用1~2倍组织体积的混合酶，在37度恒温摇床100rpm振荡消化10min ~30min；所述混合酶包含：0.1mg/ml的I型胶原酶、0.1mg/ml的II型胶原酶、0.1mg/ml透明质酸酶、0.05mg/ml中性蛋白酶和0.02mol/L枸橼酸；(5)消化结束后加适量FBS终止，300目滤网过滤，加大量生理盐水冲洗滤渣，获得尽量多的细胞；(6)滤液经1000rpm~2000rpm离心5~15min后，弃上清，再加生理盐水洗涤，1000rpm~1500rpm离心2min~10min，得单核细胞；(7)磁珠分选获得OCT‑4阳性、Nanog阳性和STRO‑1阴性的目标细胞。