[发明专利]从胎盘胎儿面绒毛膜中提取亚全能干细胞的方法

说明书

本发明涉及一种从胎盘胎儿面绒毛膜中提取亚全能干细胞的方法。该方法包括以下步骤：将胎盘去除羊膜和瘀血后，反复冲洗胎盘表面进行消毒处理；剪取胎儿面绒毛膜于玻璃皿中，尽量剔除表面残留的胎盘小叶组织，剪碎至小块；使用网，用大量生理盐水冲洗组织小块，去除其中残留的血细胞；组织消化：使用混合酶，在恒温摇床振荡消化；消化结束后加适量FBS终止，滤网过滤，加大量生理盐水冲洗滤渣，获得尽量多的细胞；离心，弃上清，加盐水洗涤，离心，得单核细胞；磁珠分选(OCT‑4阳性、Nanog阳性和STRO‑1阴性)，获得目标细胞。本发明还涉及该方法获得的亚全能干细胞以及它们的制药用途。这些亚全能干细胞具有优异的特点。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，涉及一种来源于胎盘胎儿面绒毛膜的亚全能干细胞的方法，还涉及一种从胎盘胎儿面绒毛膜中提取亚全能干细胞的方法，本发明进一步涉及该亚全能干细胞的用途。所得的亚全能干细胞还可以进一步地被扩增。

背景技术

哺乳动物生物体是由万亿个细胞构成的。细胞是人体的基本结构单位和功能单位，由干细胞分化而来，因此干细胞是人体各种组织器官的起源细胞。干细胞具有自我复制和多向分化的特征。在正常生殖生理过程中，干细胞由受精卵分化而来。受精卵最初发育形成原始胚胎干细胞，后者具有形成完整个体的全部潜能。原始胚胎干细胞进一步分化增殖形成囊胚样结构，其内层细胞群的细胞也称胚胎干细胞。囊胚内层的单个胚胎干细胞不能形成一个完整的个体，但具有形成人体各种组织的全能性。囊胚胚胎干细胞继续分化发育，逐步形成胎儿各器官的功能执行细胞，同时以不对称分裂增殖的模式在机体组织特别是造血组织，包括连接胎儿和母体的胎盘脐带血、骨髓、外周血、肝和脾中保留有不同分化潜能的干细胞。在整个胎儿发育到成年这个漫长而复杂的过程中，干细胞逐级丧失其全能性，形成亚全能干细胞(Pluripotent stem cell，PSC；亦有称为sub-totipotent stem cells)、多能干细胞(Multipotent stem cell)和专能干细胞(Specialized stem cell)，后者按分化功能分别称造血干细胞、血管干细胞、皮肤干细胞，等等。这些处于不同发育阶段的干细胞在人体组织器官的发育生长、损伤修复过程中发挥着决定性的作用，因此干细胞可以用来新陈代谢、修复组织器官，使机体活力旺盛而保持健康状况。

迄今为止，人们对造血干细胞等专能干细胞的了解和临床使用比较深入，对胚胎干细胞的了解也有长足的进展，但对亚全能干细胞，即在发育阶段及分化能力上与胚胎干细胞接近，表达胚胎干细胞的许多特征，又具备多能干细胞的许多生物学特征，移植到体内不产生畸胎瘤，这样一类干细胞了解甚少。

但是，亚全能干细胞属于成体干细胞范畴，避免了类似胚胎干细胞的医学伦理问题，其在临床上具有广阔现实的应用前景。因此，亚全能干细胞已经成为干细胞研究的一个热点。

近年来研究表明，在成体胎盘组织中，富含着一种具有多向分化能力的亚全能干细胞。胎盘是哺乳动物妊娠期间母子间交换物质的过渡性器官，其生理功能已被广泛研究，但是胎盘作为一种细胞资源，其研究还处在起步阶段。也就是说，上皮层的形成早于内、中、外三个胚层的发生，因此，胎盘亚全能细胞的分化能力强于其他起源于三个胚层的多能干细胞。根据已有的研究显示，胎盘亚全能细胞可以向内、中、外三个胚层的细胞进行分化，例如，胎盘亚全能细胞可以诱导分化成为心肌细胞、神经细胞、肝脏细胞、胰岛细胞等等。此外，多项动物实验表明，胎盘亚全能细胞可以有效治疗肺纤维化、肝硬化、帕金森和多发性硬化等病症。

胎盘亚全能干细胞是一种重要的细胞资源。因此人胎盘亚全能干细胞属于成体干细胞范畴，避免了胚胎干细胞的伦理争议，而且胎盘的获取容易，不会对产妇造成二次伤害，具有非常广阔的市场前景。