[发明专利]叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法

摘要

一种叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法，采用纳米脂质体包埋姜黄素，并将叶酸-壳聚糖复合物修饰在脂质体表面，得到叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体。本发明制备的叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体平均粒径为103.6±4.1nm，zeta电位为16.35±3.54mv，分散系数为0.378±0.01，载药量达到了35.7mg/g磷脂，在25℃储存稳定性良好。它还表现出良好的缓释性，且在弱酸性环境中释放速率较弱碱性更快。24h后，在pH7.4和pH5.5的环境下分别仅有17.4%和27.7%的姜黄素释放出来。

主权项

一种叶酸‑壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法，其特征在于：（一）叶酸‑壳聚糖复合物的合成（1）所用催化剂和各原料及其摩尔比为：N‑羟基琥珀酰亚胺/1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳乙二胺盐酸盐/叶酸/壳聚糖中氨基量= 6:9:9:10，按上述摩尔比分别称取N‑羟基琥珀酰亚胺、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳乙二胺盐酸盐和叶酸，将0.150 g/mL浓度的叶酸溶于二甲基亚砜中，活化4 h；（2）将浓度为0.025 g/mL的壳聚糖加入0.3%的冰醋酸溶液中，200 r/min持续搅拌至溶液清澈透明；（3）将步骤（1）所得到的叶酸溶液缓慢加入到步骤（2）所得到的壳聚糖溶液中，同时以200 r/min持续搅拌反应16 h；（4）用0.1 M氢氧化钠溶液将步骤（3）所得反应产物调至pH 9.0，并转移至3.5 KDa的透析袋中，于pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液即PBS中透析2天，再于蒸馏水中透析2天；（5）将步骤（4）所得溶液冷冻干燥，得到黄色海绵状叶酸‑壳聚糖复合物；全部操作均在避光环境下进行；（二）薄膜分散—动态高压微射流法制备姜黄素纳米脂质体（1）脂质体原材料各组分及其重量百分比为：姜黄素0.05% ‑ 0.2%，大豆磷脂1.4% ‑ 5.6%，胆固醇0.22% ‑ 0.88%，吐温‑80 0.4% ‑ 1.6%，其余的是pH 6.5浓度为0.05 M的磷酸盐缓冲溶液即PBS，为91.7% ‑ 97.9%；按上述重量百分比分别称取姜黄素、大豆磷脂、胆固醇和吐温‑80，在45 ℃水浴条件下，按1 g大豆磷脂溶于15 mL无水乙醇，使得各组分完全溶解；（2）将步骤（1）所得溶液于旋转蒸发仪上减压除去无水乙醇，形成均匀薄膜；（3）加入pH 6.5浓度为0.05 M的磷酸盐缓冲溶液（PBS）洗膜，形成黄色粗脂质体悬浊液；（4）用高压微射流均质机处理步骤（3）得到的脂质体悬浊液，压力为120 MPa，处理次数为2次，得到黄色透亮的姜黄素纳米脂质体溶液；（三）叶酸‑壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备（1）叶酸‑壳聚糖复合物与磷脂的重量比为1:16.8；将步骤（一）得到的叶酸‑壳聚糖复合物按5 mg/mL溶于1%的冰醋酸溶液中，200 r/min持续搅拌至溶液清澈透明；（2）按上述质量比将步骤（1）所得溶液缓慢加入到步骤（二）所得姜黄素纳米脂质体溶液中，300 r/min持续搅拌反应2 h，得到叶酸‑壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体。