[发明专利]叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法，可进一步应用于食品、药品、化妆品等领域。

背景技术

姜黄素(curcumin,Cur)是从姜黄根茎中提取的低分子量多酚类化合物，作为一种常见的着色剂、香料和防腐剂被应用于食品和化学工业。姜黄素因其具有诸多生理活性，如抗氧化、抗炎症、抗菌、抗病毒和抗癌症等生物活性，但是，姜黄素的水溶性差、热稳定性差，在弱碱性和生理环境下不稳定，口服生物利用率极低，限制了其在食品和制药工业中的应用。随着包埋技术的发展，微胶囊、胶束、复合物纳米粒子、微乳和脂质体(liposomes)等被用来包埋姜黄素，旨在提高其生物利用率和扩大其应用范围。

脂质体主要成分是磷脂和胆固醇，具有良好的生物相容性，可以运载亲水性的、亲脂性的和两性的药物、营养素、功能性因子等。叶酸(folicacid,FA)即蝶酰谷氨酸，存在于大多数蔬菜中，是人体必需的B族维生素，且叶酸受体在多种肿瘤细胞中过度表达，叶酸作为癌细胞靶向分子被广泛研究。在N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳乙二胺盐酸盐的催化作用下，壳聚糖(chitosan,CS)分子的氨基可以和叶酸发生酰化反应产生叶酸-壳聚糖复合物，可通过静电相互作用修饰在脂质体表面。

薄膜分散法是脂质体制备最经典的方法，该法更适合包埋脂溶性药物。动态高压微射流设备可产生100～300MPa的静压力，使得物料发生强剪切粉碎、高速撞击、气蚀、振荡和膨化等作用。薄膜分散结合动态高压微射流法可获取稳定均一的小粒径脂质体。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术不足提供一种为优化叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法，以提高脂质体的稳定性，评价叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的储存稳定性和缓释性能，为叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的开发提供理论依据和技术参考。

本发明所述方法包括下列步骤：

(一)叶酸-壳聚糖复合物的合成：

(1)所用催化剂和各原料及其摩尔比为：N-羟基琥珀酰亚胺/1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳乙二胺盐酸盐/叶酸/壳聚糖中氨基量＝6:9:9:10，按上述摩尔比分别称取N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳乙二胺盐酸盐和叶酸，将0.150g/mL浓度的叶酸溶于二甲基亚砜中，活化4h；

(2)将浓度为0.025g/mL的壳聚糖加入0.3％的冰醋酸溶液中，200r/min持续搅拌至溶液清澈透明；

(3)：将步骤(1)所得到的叶酸溶液缓慢加入到步骤(2)所得到的壳聚糖溶液中，同时以200r/min持续搅拌反应16h；

(4)用0.1M氢氧化钠溶液将步骤(3)所得反应产物调至pH9.0，并转移至3.5KDa的透析袋中，于pH7.4的磷酸盐缓冲溶液即PBS中透析2天，再于蒸馏水中透析2天；

(5)将步骤(4)所得溶液冷冻干燥，得到黄色海绵状叶酸-壳聚糖复合物；

全部操作均在避光环境下进行；

(二)薄膜分散—动态高压微射流法制备姜黄素纳米脂质体：

(1)脂质体原材料各组分及其重量百分比为：姜黄素0.05％-0.2％，大豆磷脂1.4％-5.6％，胆固醇0.22％-0.88％，吐温-800.4％-1.6％，其余的是pH6.5浓度为0.05M的磷酸盐缓冲溶液即PBS，为91.7％-97.9％；按上述重量百分比分别称取姜黄素、大豆磷脂、胆固醇和吐温-80，在45℃水浴条件下，按1g大豆磷脂溶于15mL无水乙醇，使得各组分完全溶解；

(2)将步骤(1)所得溶液于旋转蒸发仪上减压除去无水乙醇，形成均匀薄膜；

(3)加入pH6.5浓度为0.05M的磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗膜，形成黄色粗脂质体悬浊液；

(4)用高压微射流均质机处理步骤(3)得到的脂质体悬浊液，压力为120MPa，处理次数为2次，得到黄色透亮的姜黄素纳米脂质体溶液；

(三)叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备：

(1)叶酸-壳聚糖复合物与磷脂的重量比为1:16.8；将步骤(一)得到的叶酸-壳聚糖复合物按5mg/mL溶于1％的冰醋酸溶液中，200r/min持续搅拌至溶液清澈透明；

(2)按上述质量将步骤(1)所得溶液缓慢加入到步骤(二)所得姜黄素纳米脂质体溶液中，300r/min持续搅拌反应2h，得到叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体。