[发明专利]叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法

权利要求书

1.一种叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备方法，其特征在于：

（一）叶酸-壳聚糖复合物的合成

（1）所用催化剂和各原料及其摩尔比为：N-羟基琥珀酰亚胺/1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳乙二胺盐酸盐/叶酸/壳聚糖中氨基量=6:9:9:10，按上述摩尔比分别称取N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳乙二胺盐酸盐和叶酸，将0.150g/mL浓度的叶酸溶于二甲基亚砜中，活化4h；

（2）将浓度为0.025g/mL的壳聚糖加入0.3%的冰醋酸溶液中，200r/min持续搅拌至溶液清澈透明；

（3）将步骤（1）所得到的叶酸溶液缓慢加入到步骤（2）所得到的壳聚糖溶液中，同时以200r/min持续搅拌反应16h；

（4）用0.1M氢氧化钠溶液将步骤（3）所得反应产物调至pH9.0，并转移至3.5KDa的透析袋中，于pH7.4的磷酸盐缓冲溶液即PBS中透析2天，再于蒸馏水中透析2天；

（5）将步骤（4）所得溶液冷冻干燥，得到黄色海绵状叶酸-壳聚糖复合物；

全部操作均在避光环境下进行；

（二）薄膜分散—动态高压微射流法制备姜黄素纳米脂质体

（1）脂质体原材料各组分及其重量百分比为：姜黄素0.05%-0.2%，大豆磷脂1.4%-5.6%，胆固醇0.22%-0.88%，吐温-800.4%-1.6%，其余的是pH6.5浓度为0.05M的磷酸盐缓冲溶液即PBS，为91.7%-97.9%；按上述重量百分比分别称取姜黄素、大豆磷脂、胆固醇和吐温-80，在45℃水浴条件下，按1g大豆磷脂溶于15mL无水乙醇，使得各组分完全溶解；

（2）将步骤（1）所得溶液于旋转蒸发仪上减压除去无水乙醇，形成均匀薄膜；

（3）加入pH6.5浓度为0.05M的磷酸盐缓冲溶液（PBS）洗膜，形成黄色粗脂质体悬浊液；

（4）用高压微射流均质机处理步骤（3）得到的脂质体悬浊液，压力为120MPa，处理次数为2次，得到黄色透亮的姜黄素纳米脂质体溶液；

（三）叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体的制备

（1）叶酸-壳聚糖复合物与磷脂的重量比为1:16.8；将步骤（一）得到的叶酸-壳聚糖复合物按5mg/mL溶于1%的冰醋酸溶液中，200r/min持续搅拌至溶液清澈透明；

（2）按上述质量比将步骤（1）所得溶液缓慢加入到步骤（二）所得姜黄素纳米脂质体溶液中，300r/min持续搅拌反应2h，得到叶酸-壳聚糖修饰姜黄素纳米脂质体。