[发明专利]HNPCC外周血MLH1基因表达的实时荧光定量PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种HNPCC外周血MLH1基因表达的实时荧光定量PCR检测方法，包括：1)设计引物和探针：上游引物如SEQ ID NO.1所示或其互补链；下游引物如SEQ ID NO.2所示或其互补链；探针如SEQ ID NO.3所示或其互补链；2)提取HNPCC外周血总RNA，逆转录合成cDNA第一链；3)采用步骤1)设计的引物和探针进行实时荧光定量PCR检测；4)将所得MLH1基因拷贝数与HBA2对照基因拷贝数相除来校正，得MLH1基因相对表达量。此外，本发明还公开了该方法的检测用引物和探针。本发明特异性强，灵敏度高，定量准确，检测成本低，可用于HNPCC初筛和辅助诊断。

主权项

一种HNPCC外周血MLH1基因表达的实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)设计引物和探针；该引物的序列为：MLH1上游引物：5′‑GTTCTCCGGGAGATGTTGCATA‑3′，如SEQ ID NO.1所示或其互补链；MLH1下游引物：5′‑TGGTGGTGTTGAGAAGGTATAACTTTG‑3′，如SEQ ID NO.2所示或其互补链；该探针的序列为：MLH1TaqMan探针：F‑CCTCAGTGGGCCTTGGCACAGC‑P，如SEQ ID NO.3所示或其互补链；(2)提取HNPCC家系外周血总RNA，逆转录合成cDNA第一链；(3)采用步骤(1)设计的MLH1引物和探针进行实时荧光定量PCR检测，以保守基因HBA2作为对照；(4)将每一标本所得MLH1基因拷贝数与其相对应的HBA2基因拷贝数相除来校正不同标本之间RNA的质量和逆转录效率的差异，得出MLH1基因相对表达量；在符合Amsterdam Ⅱ标准家系间，比较健康人与患者之间外周血MLH1基因表达水平差异。