[发明专利]一种多溶剂法提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法

摘要

本发明公开了一种多溶剂法提取和大孔树脂法分离两面针共同抗肿瘤成分的方法，包括以下步骤：1.药材粉碎；2.酶解预处理；3.中性高浓度乙醇提取与富集；4.酸性低浓度乙醇提取与富集；5.酸性高浓度乙醇提取与富集；6.合并，得两面针共同抗肿瘤成分混合物。用MTT法测得混合物对HepG‑2肝癌细胞的半数抑制浓度为0.04～0.06mg/mL，对Hela宫颈癌细胞的半数抑制浓度为0.06～0.08mg/mL。本发明用不同酸碱性、不同极性的溶剂依次提取，分别上大孔树脂柱进行富集，避免了酸破坏部分抗肿瘤成分，又最大限度地提取到不同极性的抗肿瘤成分，且工艺简便，使共同抗肿瘤成分的总产率最大化，总疗效最大化，开发、制备成优良抗肿瘤药的潜力巨大，市场前景好。

主权项

1.一种多溶剂法提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法，包括以下步骤：(1)药材粉碎：两面针药材清洗、切片、晒干、粉碎至粒径≤0.5～2mm；(2)酶解预处理：药材中加入其质量3～6倍量pH 4.5～6.0醋酸‑醋酸钠缓冲液，用纤维素酶、果胶酶复合酶于温度≥30℃下预处理0.5～1.5h；所述复合酶中纤维素酶、果胶酶与药材的质量比均为1:200～1:300；(3)中性高浓度乙醇提取与富集：经酶解预处理的药材以其质量10倍～12倍的中性高浓度乙醇用超声法、回流法或浸渍法进行第一次提取、滤过，得滤液1和滤渣1，滤液1减压回收乙醇后，上D‑101或HPD‑722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用3～6倍柱床体积的体积浓度为60％～80％乙醇洗脱，得洗脱液1；所述中性高浓度乙醇的体积浓度为60％～80％；(4)酸性低浓度乙醇提取与富集：滤渣1以其质量4～8倍的酸性低浓度乙醇用超声法、回流法或浸渍法进行第二次提取、滤过，得滤液2和滤渣2，滤液2减压回收乙醇后，上D‑101或HPD‑722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用3～6倍柱床体积的体积浓度为60％～80％乙醇洗脱，得洗脱液2；所述酸性低浓度乙醇是加质量浓度为0.5％～1％的盐酸或硫酸的低浓度乙醇，其体积浓度为30％～50％；(5)酸性高浓度乙醇提取与富集：滤渣2再以其质量4～6倍的酸性高浓度乙醇用超声法、回流法或浸渍法进行第三次提取、滤过，得滤液3，滤液3减压回收乙醇后，上D‑101或HPD‑722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用3～6倍柱床体积的体积浓度为60％～80％乙醇洗脱，得洗脱液3；所述酸性高浓度乙醇是加质量浓度为0.5％～1％的盐酸或硫酸的高浓度乙醇，其体积浓度为60％～80％；(6)合并：将洗脱液1、洗脱液2和洗脱液3合并后，减压回收乙醇得浓缩液，浓缩液经干燥、粉碎，得两面针共同抗肿瘤成分混合物，混合物占步骤(1)的药材质量5％～10％，其中氯化两面针碱、白屈菜红碱、6‑甲氧基‑5，6‑二氢白屈菜红碱、乙氧基白屈菜红碱、血根碱、别隐品碱和芝麻素等共同抗肿瘤成分占混合物质量30％～40％，用MTT法测得混合物对HepG‑2肝癌细胞的半数抑制浓度为0.04～0.06mg/mL，对Hela宫颈癌细胞的半数抑制浓度为0.06～0.08mg/mL。