[发明专利]一种多溶剂法提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法

说明书

本发明公开了一种多溶剂法提取和大孔树脂法分离两面针共同抗肿瘤成分的方法，包括以下步骤：1.药材粉碎；2.酶解预处理；3.中性高浓度乙醇提取与富集；4.酸性低浓度乙醇提取与富集；5.酸性高浓度乙醇提取与富集；6.合并，得两面针共同抗肿瘤成分混合物。用MTT法测得混合物对HepG‑2肝癌细胞的半数抑制浓度为0.04～0.06mg/mL，对Hela宫颈癌细胞的半数抑制浓度为0.06～0.08mg/mL。本发明用不同酸碱性、不同极性的溶剂依次提取，分别上大孔树脂柱进行富集，避免了酸破坏部分抗肿瘤成分，又最大限度地提取到不同极性的抗肿瘤成分，且工艺简便，使共同抗肿瘤成分的总产率最大化，总疗效最大化，开发、制备成优良抗肿瘤药的潜力巨大，市场前景好。

技术领域

本发明属于药品和保健品领域，具体是一种多溶剂法提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法。

背景技术

两面针系芸香科花椒属植物两面针Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.的干燥根，又名蔓椒、入地金牛、双背针等，有祛风、通络、消肿、止痛之功效，主治风湿骨痛、跌打损伤、胃痛、牙痛、喉痹、瘰疬、毒蛇咬伤和汤、火烫伤等多种病症，最早以蔓椒之名记载于《神农本草经》，《中国药典》2010版收载。两面针含有多种化学成分，包括氯化两面针碱、两面针碱、白屈菜红碱、乙氧基白屈菜红碱、6-甲氧基-5，6-二氢白屈菜红碱、血根碱、α-别隐品碱、茵芋碱、木兰花碱、白鲜碱、崖椒定碱、氧化刺椒碱、鹅掌楸碱、博落回醇碱和德卡林碱等；黄酮类成分有橙皮苷、香叶木苷、牡荆素等；木脂素成分有结晶-8、L-芝麻素、L-细辛脂素、L-丁香树脂酚等；还有香豆素、萜类、醌类、甾体和有机酸等。大量研究表明，氯化两面针碱、两面针碱、白屈菜红碱、6-甲氧基-5，6-二氢白屈菜红碱、乙氧基白屈菜红碱、血根碱、别隐品碱、崖椒定碱、异崖椒定碱和芝麻素等都有抗肿瘤活性。两面针碱、氯化两面针碱和别隐品碱可通过抑制拓扑异构酶I或Ⅱ来抑制肿瘤细胞增殖，氯化两面针碱和芝麻素可通过控制细胞周期来抑制肿瘤细胞增殖，氯化两面针碱、白屈菜红碱和异崖椒定碱可诱导肿瘤细胞凋亡，氯化两面针碱可逆转肿瘤细胞多药耐药。因此，两面针中多种成分在肿瘤细胞增殖和凋亡的不同阶段发挥抗肿瘤作用，它们在抗肿瘤方面能发挥共同作用。中药中多种成分共同发挥整体的生物效应正是中医药治疗疾病的核心价值观。因此，把具有共同抗肿瘤作用的多种成分同时充分提取出来，可为抗肿瘤药开发、制备做准备。

在已有的两面针提取工艺研究中，尚无文献的研究目标是把共同抗肿瘤成分同时充分提取出来。近似的工艺有，雷欣潮以80％乙醇回流提取两面针3次，每次以14倍量溶剂回流1h，氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱、L-芝麻素有一定的产率；陆世惠用纤维素酶、果胶酶(酶底物质量比均为1:250)于室温下(30℃)在pH5缓冲液中预处理两面针药材粉末30min，再分别用12、4和3倍量60％乙醇(含0.5％盐酸)浸渍提取3次，每次2h，总生物碱提取率85.22％；尚有一些其他两面针提取工艺发表。所有这些工艺都存在以下不足：

第一，共同抗肿瘤的多种成分结构不同，其最适提取溶剂不同，氯化两面针碱、两面针碱、别隐品碱、6-甲氧基-5，6-二氢白屈菜红碱、乙氧基白屈菜红碱和芝麻素等宜用高浓度乙醇提取，而白屈菜红碱和血根碱等宜用低浓度乙醇提取，用相同溶剂多次提取不能把它们都充分地提取出来。

第二，提取溶剂不加酸，则抗肿瘤成分产率低；提取溶剂加酸，可以促进氯化两面针碱、白屈菜红碱、血根碱和芝麻素等抗肿瘤成分的提取，却破坏6-甲氧基-5，6-二氢白屈菜红碱、乙氧基白屈菜红碱和别隐品碱等抗肿瘤成分的结构。

发明内容

本发明的目的是，为了克服现有技术的不足，提供一种多溶剂法提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法。该方法用一种简易、经济的方法充分提取和富集两面针共同抗肿瘤成分，同时保护抗肿瘤成分不遭破坏，为抗肿瘤药的开发、制备做准备。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种多溶剂法提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法，包括以下步骤：