[发明专利]一种多溶剂法提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法

权利要求书

1.一种多溶剂法提取和大孔树脂法富集两面针共同抗肿瘤成分的方法，包括以下步骤：

(1)药材粉碎：两面针药材清洗、切片、晒干、粉碎至粒径≤0.5～2mm；

(2)酶解预处理：药材中加入其质量3～6倍量pH 4.5～6.0醋酸-醋酸钠缓冲液，用纤维素酶、果胶酶复合酶于温度≥30℃下预处理0.5～1.5h；所述复合酶中纤维素酶、果胶酶与药材的质量比均为1:200～1:300；

(3)中性高浓度乙醇提取与富集：经酶解预处理的药材以其质量10倍～12倍的中性高浓度乙醇用超声法、回流法或浸渍法进行第一次提取、滤过，得滤液1和滤渣1，滤液1减压回收乙醇后，上D-101或HPD-722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用3～6倍柱床体积的体积浓度为60％～80％乙醇洗脱，得洗脱液1；所述中性高浓度乙醇的体积浓度为60％～80％；

(4)酸性低浓度乙醇提取与富集：滤渣1以其质量4～8倍的酸性低浓度乙醇用超声法、回流法或浸渍法进行第二次提取、滤过，得滤液2和滤渣2，滤液2减压回收乙醇后，上D-101或HPD-722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用3～6倍柱床体积的体积浓度为60％～80％乙醇洗脱，得洗脱液2；所述酸性低浓度乙醇是加质量浓度为0.5％～1％的盐酸或硫酸的低浓度乙醇，其体积浓度为30％～50％；

(5)酸性高浓度乙醇提取与富集：滤渣2再以其质量4～6倍的酸性高浓度乙醇用超声法、回流法或浸渍法进行第三次提取、滤过，得滤液3，滤液3减压回收乙醇后，上D-101或HPD-722大孔树脂柱，然后用纯水清洗再用3～6倍柱床体积的体积浓度为60％～80％乙醇洗脱，得洗脱液3；所述酸性高浓度乙醇是加质量浓度为0.5％～1％的盐酸或硫酸的高浓度乙醇，其体积浓度为60％～80％；

(6)合并：将洗脱液1、洗脱液2和洗脱液3合并后，减压回收乙醇得浓缩液，浓缩液经干燥、粉碎，得两面针共同抗肿瘤成分混合物，混合物占步骤(1)的药材质量5％～10％，其中氯化两面针碱、白屈菜红碱、6-甲氧基-5，6-二氢白屈菜红碱、乙氧基白屈菜红碱、血根碱、别隐品碱和芝麻素等共同抗肿瘤成分占混合物质量30％～40％，用MTT法测得混合物对HepG-2肝癌细胞的半数抑制浓度为0.04～0.06mg/mL，对Hela宫颈癌细胞的半数抑制浓度为0.06～0.08mg/mL。