[发明专利]一种高效提取食用菌菌丝体营养生长阶段RNA的方法有效
| 申请号： | 201510506182.4 | 申请日： | 2015-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN105018472B | 公开（公告）日： | 2018-01-12 |
| 发明（设计）人： | 姬丹丹;臧立华;祝德义;周茂娟;张运春 | 申请（专利权）人： | 齐鲁工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12R1/645 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司37221 | 代理人： | 李健康 |
| 地址： | 250353 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供一种可用于食用菌菌丝体营养生长阶段RNA提取的方法，可以有效去除培养基质对RNA提取过程的干扰，RNA提取效率高、纯度高、不含PCR酶抑制剂。所述RNA提取的方法，包括前处理阶段和提取阶段，前处理阶段包括下列步骤1)取一份布满菌丝体的培养基，粗研；2)加入适量的缓冲液I，放置摇床，保持温度35～40℃，摇床转速100～150rpm摇动2～3h；3)取步骤2)的溶液，3000～4000rpm低速离心10～15min；收集上清液；4)步骤3)中剩余的沉淀，加入缓冲液II洗涤2～5次，3000～4000rpm低速离心10～15min，取每次洗涤后的上清液合并；5)将步骤3)和步骤4)离心的上清液集中到一起，在转速10000～12000rpm，4℃离心10～15min，弃上清液，收集沉淀。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 提取 食用菌 菌丝体 营养 生长 阶段 rna 方法 | ||
【主权项】：
一种用于食用菌菌丝体营养生长阶段RNA提取的方法，包括前处理阶段和提取阶段，其特征在于，前处理阶段包括下列步骤：1)取一份布满菌丝体的培养基，粗研，置一洁净容器中；2)加入适量的缓冲液I，至淹没过布满菌丝体的培养基，放置摇床，保持温度35～40℃，摇床转速100～150rpm摇动2～3h；缓冲液I：20mg/mL溶菌酶500μL+20mg/mL蛋白酶K 200μL+0.02～0.1mmol/LpH 5.5～6.5PBS缓冲液配制成1000ml溶液；3)取步骤2)的溶液，3000～4000rpm低速离心10～15min；溶液分成沉淀和上清液，收集上清液；4)步骤3)中剩余的沉淀，加入缓冲液II洗涤，3000～4000rpm低速离心10～15min，洗涤过程重复2～5次，取每次洗涤后的上清液合并；缓冲液II：1mmol EDTA+10％SDS 10ml+0.02～0.1mmol pH 5.5～6.5PBS缓冲液配制成100ml 溶液；EDTA为乙二胺四乙酸；SDS为十二烷基磺酸钠；5)将步骤3)和步骤4)离心的上清液集中到一起，在转速10000～12000rpm，4℃离心10～15min，弃上清液，收集沉淀。
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