[发明专利]一种用于治疗非小细胞肺癌的新型病毒疫苗及其制备方法

摘要

本发明提供了一种用于治疗非小细胞肺癌的新型病毒疫苗及其制备方法。所述病毒疫苗的制备方法包括以下步骤：1）MVA病毒载体构建；2）特异性递呈MAGE-3抗原DC细胞的获得。通过本发明所述方法制备得到的病毒疫苗，生物稳定性高，对人体不会产生任何不良反应，无任何致病危险；所述病毒抗体容易获得大量高纯度的病毒颗粒；所述病毒疫苗表达的MAGE-A3拥有更好的免疫原性，抗原表位多，并且不容易产生耐药性；所述病毒疫苗接种需要的病毒量比其他病毒少。

主权项

一种用于治疗非小细胞肺癌的新型病毒疫苗的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：1.1 穿梭质粒的构建：将MAGE‑3基因克隆到pIIIdHR‑P7.5质粒中；1.2 重组MVA病毒的构建：a. 用MVA病毒感染细胞，培养90~120min，得到感染细胞；b. 在感染开始15~30min后，开始准备转染质粒，得到转染质粒混合液；c. 将所述转染质粒混合液加入上述感染细胞中，37℃培养24~48h，得到单层细胞；d. 反复冻融所述单层细胞2‑3次，并将细胞破碎处理2‑5次，得到rMVA溶液；e. 将所述rMVA溶液接种到细胞中，37℃培养48~72h；f. 挑取典型的rMVA感染的细胞聚集点到新的含培养基中，挑取5~15个所述聚集点；g. 重复上述步骤d至步骤f ，2~4次，直到得到较纯的rMVA；h. 将所述rMVA培养于单层细胞中，筛选不含选择基因K1L的rMVA，重复步骤d至步骤g，2~4次，直至筛选得到rMVA‑FS；i. 扩增分离得到的重组MVA‑MAGE‑3病毒，即为所述的用于治疗非小细胞肺癌的新型病毒疫苗。