[发明专利]包含突变的核酸内切酶识别区DNA及其基因组编辑应用

摘要

本发明提供一种包含突变的基因组编辑核酸内切酶靶向识别区段的DNA及其在基因组编辑中的应用，其中所述的DNA包括1)人工编辑的目标敲入序列；和2)突变的核酸内切酶识别区序列；和3)两侧同源臂序列。本发明还提供包含上述DNA的载体、系统、细胞及其上述产品在提高基因组编辑效率、制备基因修饰细胞及动物模型、制备采用基因治疗的疾病的药品等方面的应用。采用本发明的DNA及其后续产品能避免在已成功完成DNA编辑的特定基因组序列上，再次或多次发生核酸内切酶介导的双链切断和NHEJ修复，从而极大地提高基因编辑效率，避免错误突变。

主权项

一种用作基因组编辑的同源重组模板的DNA，其特征在于，所述DNA包括1)人工编辑的目标敲入序列；和2)突变的基因组编辑核酸内切酶的识别区序列；和3)两侧同源臂序列，其中，所述1)人工编辑的目标敲入序列是来源于细胞基因组上待编辑的对应目标DNA序列，并且人工完成了所需的特定点突变，特定插入突变或者特定删除突变，所述2)突变的核酸内切酶识别区是来源于基因组上核酸内切酶识别区域的对应DNA序列，并且在该序列上已经完成碱基突变，目的在于避免被基因组编辑核酸内切酶识别，防止在已经完成同源重组介导的序列编辑的基因组DNA上再次发生核酸内切酶介导的双链切割和NHEJ修复，所述3)两侧同源臂序列与待编辑的细胞基因组DNA序列完全相同，其能与对应的基因组发生同源重组，从而介导已经人工编辑的目标敲入序列和突变的识别区序列替代基因组中原有的对应DNA区域。