[发明专利]一种植物根际木霉菌分离方法

摘要

一种植物根际木霉菌分离方法，它涉及一种木霉菌分离方法。它要解决现有木霉菌分离存在分离速度慢、效率低，被分离的木霉菌多样性差的问题。方法：一、样品采集及处理；二、制备样品原液及其稀释液；三、样品原液及其稀释液，利用灭过菌的涂布涂在孟加拉红固体培养基表面，培养后获得木霉菌落；四、观察并挑取木霉菌落，分别转接到PDA斜面培养基中，培养后获得木霉菌纯培养物，即完成植物根际木霉菌的分离。本发明可在所有植物根系及根际土壤中分离出多种木霉菌，木霉菌落可在24～48h内被获得，单次分离20株以上，保证多样性鉴定的需求，免去单孢分离的步骤。

主权项

一种植物根际木霉分离方法，其特征在于它按以下步骤实现：一、样品采集及处理：采集：任意时间采集自然环境中的木本植物、草本植物、花卉、蔬菜或中草药的根系或根际土壤样品；处理：浅根系的矮小植物：戴上灭菌的手套，除去根系上附着的土壤，利用灭菌的剪刀剪取100～200g根，装入灭菌的聚丙烯塑料袋中，获得根系样品；深根系的大型植物：取10～20cm深处100～200g根际土壤装入灭菌的聚丙烯塑料袋中，获得土壤样品；二、超净工作台中，取30g根系样品或土壤样品放入装有100mL灭菌蒸馏水的三角瓶中，封上瓶盖，在140r/min的摇床中摇动10min，获得样品原液，然后制备5倍、25倍、50倍和75倍的稀释液；三、样品原液及其稀释液分别吸取200μL，利用灭过菌的涂布涂在孟加拉红固体培养基表面，各涂布10皿，共计50皿，置于25℃的培养箱中培养24～48h，获得木霉菌落；四、在超净工作台中，观察获得的木霉菌落，每种样品至少挑取20个木霉菌落，分别转接到PDA斜面培养基中，置于25℃的培养箱中培养5d，分离出木霉菌，获得纯培养物，即完成植物根际木霉菌分离；其中步骤四中孟加拉红固体培养基是装有20mL孟加拉红固体培养基的9cm培养皿。