[发明专利]一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法

摘要

本发明涉及一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，所述的提取方法包括以下步骤：样品前处理、配制固体发酵培养基、发酵培养制备菌种发酵液、超声回流提取、制备样品粗多糖、制备精多糖。本发明先对样品进行预处理、然后优化固态培养基的组分、培养温度、料水比及光照等培养条件，对冬虫夏草菌丝体生长更有利，可明显提高菌丝体中的主要有效成分之一麦甾醇的含量；在多糖提取时，先采用加有活性碳的沸水脱色，并采用加热、冷却法去除蛋白，操作简便，效果好，且不影响多糖得率；在采用乙醇进行醇沉时，采用65-80%的乙醇，多糖醇沉效果最好；整个操作简便、不需要特殊仪器及设备，适宜大规模生产应用。

主权项

一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品前处理：将保藏好的冬虫夏草菌种5‑10g经清水冲洗、烘干后，备用；（2）配制固体发酵培养基：取葡萄糖 2‑5g，玉米粉2‑4g，氮源                1‑2g，麦麸2‑4 g，KH₂PO₄ 2‑4g,MgSO₄ 1‑2g，Vitamin B₁ 2‑4g，Vitamin B₂ 3‑6g，培养基中加入蒸馏水，加热煮沸，调节PH，趁热倒入容器中，高压蒸汽灭菌，倒在平板上；（3）发酵培养：将步骤（1）中经样品前处理后的样品接种到步骤（1）中制备好的培养基中，培养完成后取菌种发酵液备用； （4）取步骤（3）中制得的菌种发酵液加水进行超声回流提取，经0.45um微孔滤膜过滤，取样品滤液备用；（5）将步骤（4）中制备的样品滤液蒸发浓缩至原体积的1/3‑1/2，再加乙醇进行醇沉，经过滤后，冷冻离心，取上清液在4℃条件下静置12h，在常温下离心，经0.45um微孔滤膜过滤得沉淀，采用无水乙醇洗涤1‑3次，浓缩得到样品粗多糖；（6）将步骤（5）中制得的样品粗多糖采用添加活性碳的沸水溶解脱色，冷却，再加沸水，再冷却，去除蛋白，将去除蛋白的样品溶液置入透析袋中，在蒸馏水中透析24h，将5‑10倍体积的乙醇加入透析后的溶液中，在4℃条件下沉淀过夜，离心，弃上清，取沉淀物干燥，制得精多糖。