[发明专利]一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法

权利要求书

1.一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）样品前处理：将保藏好的冬虫夏草菌种5-10g经清水冲洗、烘干后，备用；

（2）配制固体发酵培养基：取葡萄糖2-5g，玉米粉2-4g，氮源1-2g，麦麸2-4g，KH₂PO₄2-4g,MgSO₄1-2g，VitaminB₁2-4g，VitaminB₂3-6g，培养基中加入蒸馏水，加热煮沸，调节PH，趁热倒入容器中，高压蒸汽灭菌，倒在平板上；

（3）发酵培养：将步骤（1）中经样品前处理后的样品接种到步骤（1）中制备好的培养基中，培养完成后取菌种发酵液备用；

（4）取步骤（3）中制得的菌种发酵液加水进行超声回流提取，经0.45um微孔滤膜过滤，取样品滤液备用；

（5）将步骤（4）中制备的样品滤液蒸发浓缩至原体积的1/3-1/2，再加乙醇进行醇沉，经过滤后，冷冻离心，取上清液在4℃条件下静置12h，在常温下离心，经0.45um微孔滤膜过滤得沉淀，采用无水乙醇洗涤1-3次，浓缩得到样品粗多糖；

（6）将步骤（5）中制得的样品粗多糖采用添加活性碳的沸水溶解脱色，冷却，再加沸水，再冷却，去除蛋白，将去除蛋白的样品溶液置入透析袋中，在蒸馏水中透析24h，将5-10倍体积的乙醇加入透析后的溶液中，在4℃条件下沉淀过夜，离心，弃上清，取沉淀物干燥，制得精多糖。

2.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，其特征在于，步骤（1）与步骤（6）中所述的烘干温度均为50-80℃。

3.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，其特征在于，步骤（2）中加蒸馏水的量是按料水比（1-3）:（1.5-5）的体积加入的。

4.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，其特征在于，步骤（2）中调节PH为调节PH至6.5-7.2。

5.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，其特征在于，步骤（2）中所述的高压蒸汽灭菌时间为10-20min。

6.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，其特征在于，步骤（3）中所述的培养温度为25-28℃，培养为无光照培养，培养时间为5-7d。

7.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，其特征在于，步骤（4）中所述的超声回流提取温度为80-100℃，提取时间为每次1-2h，提取次数为3-5次。

8.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，其特征在于，步骤（5）中所述的冷冻离心温度为-10--4℃，步骤（5）中两次离心及步骤（6）中的离心速度均为4000-8000r/min，离心时间均为10-20min。

9.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，其特征在于，步骤（6）中所述的添加活性碳的沸水中，活性碳的质量浓度为1-3%。

10.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草固体发酵液中多糖的提取方法，其特征在于，步骤（6）中所述的透析膜为截留分子量为6000-8000的半透膜，所述的乙醇浓度为65-80%。