[发明专利]一种深绿木霉气升式发酵罐发酵制备耐热阿魏酸酯酶与纤维素酶复合酶制剂的方法

摘要

本发明公开了一种深绿木霉气升式发酵罐发酵制备耐热阿魏酸酯酶与纤维素酶复合酶制剂的方法，以深绿木霉为生产菌株，通过发酵菌种的准备、孢子悬液的制备、种子液制备、摇瓶液体发酵、复合酶制剂的制备的工艺步骤制备耐热阿魏酸酯酶与纤维素酶复合酶制剂，得到的复合酶制剂酶活力强、可溶于水、无异味、热稳定性好、催化活性强，具有极好的工业化应用前景。

主权项

一种深绿木霉气升式发酵罐发酵制备耐热阿魏酸酯酶与纤维素酶复合酶制剂的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，发酵菌种的准备：将深绿木霉（Trichoderma atroviride）Aws26菌种在PDA活化培养基上划线活化，置于37‑40℃恒温培养箱中培养48‑72h，得活化菌种；所述深绿木霉（Trichoderma atroviride）AWS26，已于2014年1月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC），保藏编号：CGMCC No. 8673；步骤2，制备深绿木霉孢子悬液，从步骤1所得活化菌种中刮取深绿木霉菌丝，转移至深绿木霉孢子培养基上，置于37‑40℃生化培养箱内培养72h至菌丝长出孢子，经两次传代培养恢复其活力，以含有0.01%吐温80的无菌水洗涤收集孢子，制备孢子含量为1.0×108CFU/mL的孢子悬液；步骤3，制备一级种子液：将步骤2所得孢子悬液以5‑6v/v%的接种量接入装有150‑200mL种子培养基的锥形瓶中，37‑42℃摇床培养32‑48h，转速160‑180r/min，得一级种子液；步骤4，复合酶气升式发酵：将步骤3所得一级种子液以5‑8%的接种量接入装有发酵培养基的发酵罐中，发酵罐压0.05Mpa，40‑42℃初始发酵2d，发酵培养基初始pH4.5‑6.0，无菌空气通风比1:0.6‑0.8，发酵2d至4d，发酵温度降为32‑37℃，无菌空气通风比1:0.4‑0.6，pH调节至6.0‑6.5，发酵结束得粗酶液；步骤5，复合酶制剂的制备：将步骤4所得粗酶液中加入保护剂2‑3wt%的糊精、1‑3wt%的可溶性淀粉、0.1‑0.2wt%的山梨酸钾，搅拌分散后，‑20℃冷冻8‑10h， 30‑40Pa、‑35℃冷冻15‑18h，即得复合酶制剂。