[发明专利]一种快速测定山羊乳腺上皮细胞脂肪酸成分的方法

摘要

本发明公开了一种快速测定山羊乳腺上皮细胞脂肪酸成分的方法，步骤包括：利用细胞刮铲收集细胞；应用超声波破碎细胞并利用硫酸/甲醇溶液进行脂肪酸甲酯化；利用HCl/正己烷溶液进行萃取抽提；利用无水Na₂SO₄进行脂肪酸样品的干燥处理并用GC-MS进行脂肪酸成分测定。本发明的方法较传统的脂质提取方法，具有简单，快速，准确的优点，且适合于批量处理。

主权项

一种快速测定山羊乳腺上皮细胞脂肪酸成分的方法，其特征在于：包括以下步骤：A1：收集细胞待细胞培养皿中细胞密度为90％以上时弃去细胞培养液，用PBS缓冲液清洗细胞，然后向所述细胞培养皿中添加一定量的硫酸/甲醇溶液，然后用细胞刮铲将细胞完全转移至预先加入一定量的硫酸/甲醇溶液的微量玻璃反应瓶中；所述细胞指山羊乳腺上皮细胞；A2：甲酯化处理将所述微量玻璃反应瓶盖拧紧密封，然后进行超声处理，超声处理后于水浴中放置一定时间，然后于室温下自然冷却；A3：脂肪酸抽提待冷却至室温后向所述微量玻璃反应瓶中加入1.5mL～2.5mL0.1M的HCl水溶液，并使用硅化枪头向微量玻璃反应瓶中加入800μL～1.5mL正己烷，然后涡旋震荡30s～1min震荡后离心；A4：成分测定使用硅化枪头取离心所得上清液并加入至装有无水Na₂SO₄的2mL硅化离心管中，然后震荡30s～1min后静置5～7min，静置后离心，吸取离心所得上清液并加入至玻璃进样瓶中用于GC‑MS分析。