[发明专利]一种快速测定山羊乳腺上皮细胞脂肪酸成分的方法

权利要求书

1.一种快速测定山羊乳腺上皮细胞脂肪酸成分的方法，其特征在于：包括以下步骤：

A1：收集细胞

待细胞培养皿中细胞密度为90％以上时弃去细胞培养液，用PBS缓冲液清洗细胞，然后向所述细胞培养皿中添加一定量的硫酸/甲醇溶液，然后用细胞刮铲将细胞完全转移至预先加入一定量的硫酸/甲醇溶液的微量玻璃反应瓶中；所述细胞指山羊乳腺上皮细胞；

A2：甲酯化处理

将所述微量玻璃反应瓶盖拧紧密封，然后进行超声处理，超声处理后于水浴中放置一定时间，然后于室温下自然冷却；

A3：脂肪酸抽提

待冷却至室温后向所述微量玻璃反应瓶中加入1.5mL～2.5mL0.1M的HCl水溶液，并使用硅化枪头向微量玻璃反应瓶中加入800μL～1.5mL正己烷，然后涡旋震荡30s～1min震荡后离心；

A4：成分测定

使用硅化枪头取离心所得上清液并加入至装有无水Na₂SO₄的2mL硅化离心管中，然后震荡30s～1min后静置5～7min，静置后离心，吸取离心所得上清液并加入至玻璃进样瓶中用于GC-MS分析。

2.根据权利要求1所述一种快速测定山羊乳腺上皮细胞脂肪酸成分的方法，其特征在于：所述步骤A1中，所述细胞培养皿的规格为60mm～100mm，所述一定量的硫酸/甲醇溶液是指500μL～1.5mL2.5％硫酸/甲醇溶液；所述2.5％硫酸/甲醇溶液指含硫酸体积百分比为2.5％的甲醇溶液。

3.根据权利要求1所述一种快速测定山羊乳腺上皮细胞脂肪酸成分的方法，其特征在于：所述步骤A2中，所述超声处理的时间为10～20min，所述水浴指80℃水浴，所述一定时间为60min。

4.根据权利要求1所述一种快速测定山羊乳腺上皮细胞脂肪酸成分的方法，其特征在于：所述步骤A3中，向所述微量玻璃反应瓶中加入2mL0.1M的HCl水溶液。

5.根据权利要求1所述一种快速测定山羊乳腺上皮细胞脂肪酸成分的方法，其特征在于：所述步骤A3中，离心的条件为：3000r/min离心5min。